青海湖发光细菌的分离鉴定及电镜观察

2004年由青海湖裸鲤体表及内脏中分得22株发光细菌,经51项表型特性测定及免疫学测定,结果表明属于已知的淡水型发光菌弧菌属的青海弧菌(Vibrio qinghaiensis).它们在营养方面可以利用几十种有机物作为唯一的碳源与能源,能在细胞内累积聚β-羟丁酸,生长最适pH值为9.0.不需要Na^＋就可以生长与发光,最适生长盐度为1％~1.2％.本次分得的22株细菌还比较耐温,均可在40 ℃中生长,以前报道的青海弧菌菌株在40 ℃生长的仅为10％.电镜负染色形态观察到细菌表面除单极生鞭毛外,周生还具有短柱状、管状及条索状的突起物,其长短不一.电镜超薄切片也观察到体表有微小突起和泡状突起,与菌毛明显不同.这是从未在其它发光细菌中见到过的.     

An rpoB gene-based PCR-DGGE method for simultaneous detection of multiple Vibrio species

Using PCR-denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) targeting the RNA polymerase beta subunit (rpoB) gene, a simultaneous detection method for Vibrio species was established. rpoB gene-based PCR-DGGE was carried out with eight Vibrio Reference strains (each from different species), mixed sample (including these Vibrio Reference strains),two non Vibrio strains, four environmental Vibrio strains, and three unidentified environmental strains. For comparison, 16S rRNA gene-based PCR-DGGE of the eight Vibrio Reference strains was performed with universal primers. In addition, three unidentified strains were identified by 16S rRNA and gyrB gene sequencing and API20E system in order to confirm the accuracy of rpoB gene-based PCR-DGGE detection. Results revealed that rpoB-based PCR-DGGE could well discriminate eight Vibrio Reference strains and could not discriminate different strains within the same species. The bands derived from two non Vibrio strains could not match with any bands in Reference marker. Meanwhile, 16S rRNA gene-based DGGE failed to distinguish these Reference strains. Furthermore, four out of eight Vibrio species exhibited heterogenous bands in 16S rRNA gene-based DGGE. Sequencing and API 20E identification of unidentified strains coincided with the detection by rpoB gene-based PCR-DGGE. The results demonstrated that rpoB-based PCR-DGGE provided a rapid and efficient method for simultaneous detection of multiple Vibrio species, which can avoid the limitations inherent in 16S rRNA gene-based PCR-DGGE.     

五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究

取五倍子、乌梅等45种中草药,分别采用水提取法和醇提取法制备提取液,除菌后滴加至Φ6mm空白药敏滤纸片上,制成试验用药敏纸片。测试了提取物对拟态弧菌SM060818、梅氏弧菌SM060813、霍利斯弧菌SM060913等3种分离自锯缘青蟹体外抑菌的效果。结果表明:所试验的45种中药提取物中,有28种中药提取物对试验弧菌表现有抑菌作用;其中五倍子、乌梅、秦皮、艾叶中药提取物抑菌作用较好,对3种菌株均有较好抑菌效果;天冬、白头翁、赤芍、金银花、黄精、黄柏、青蒿等11种中草药提取物仅对2种菌株有较好抑制作用,千里光、穿心莲等17种中药提取物对弧菌无抑制作用;大部分中药抑菌活性成份均为水溶性提取物,青蒿存在明显的醇溶性抑菌物质。测定了五倍子等9种中药提取物对致病弧菌的最低抑菌浓度(MIC),五倍子、乌梅和天冬3种药物对拟态弧菌和梅氏弧菌的MIC分别为0.172mg/mL、0.461mg/mL、1.042mg/mL,对霍利斯弧菌的MIC分别为0.086mg/mL、0.922mg/mL和1.042mg/mL,有较好的抑菌作用。     

军曹鱼重要病害及其防治技术

利用常规细菌分离培养的方法获得军曹鱼病原菌3株,确定了副溶血弧菌、哈维弧菌、普通变形杆菌对军曹鱼的致病力,同时通过人工感染试验确定了神经坏死病毒对军曹鱼的致病力。用甲醛灭活全菌作为疫苗,分析了葡聚糖、酵母多糖、LPS和弗氏佐剂对疫苗免疫效果的影响,发现LPS是良好的佐剂。将重组的神经坏死病毒的MCP基因表达的融合蛋白制备成疫苗,注射接种鱼体,可提高鱼体的免疫保护力和生长率。通过免疫因子测定,感染试验以及生长和营养等因子,研发了1种中草药混合剂和半乳糖作为军曹鱼的免疫增强剂。另外通过对军曹鱼免疫血清抗菌因子、生化指标、酶等测定,以及组织化学等方法,进行了军曹鱼免疫机理方面的研究,包括军曹鱼免疫系统的发生发育学,盐度等理化因子对军曹鱼幼鱼免疫系统及免疫应激能力的影响等。     

食源性致病菌污染调查与高通量快速检测技术研究

食品安全是事关人民健康与社会和谐的热点问题,而食源性致病菌的污染则是导致食物中毒与爆发性流行的最主要原因.我国国家标准中对致病菌的检测方法步骤繁琐、周期长,已不能适应大规模快速监管的需要.南京市产品质量监督检验院、国家农副产品质检中心自2005年至今,先后完成了“食品中沙门氏菌、副溶血弧菌污染状况调查及快速检验方法研究”与“常见食源性致病菌的多重PCR检测”项目,在对江苏地区食源性致病菌污染状况调查分析的基础上,应用PCR、多重PCR、多重Taqman荧光实时PCR (RTi-PCR)等分子生物学技术建立并完善了多种食源性致病菌及其不同组合的快速高通量检测方法.     

一种趋磁弧菌及其磁小体特性的研究

南京城郊一淡水池塘污泥中存在一种弧形趋磁细菌NMV—1,在地磁场作用下一致向北游动,细胞可连接成链状,有2～13个菌体,长达2～10μm,透射电子显微镜(TEM)观察表明每个细胞内含11～15颗磁小体,呈长方体,沿菌体长轴排列成链状,磁小体尺度为:长120nm,宽80nm,处在稳定的单磁畴晶体范围内.能谱分析仪显示该菌磁小体的元素组成为铁(Fe),由晶体衍射分析表明磁小体为单晶结构.NMV—1趋磁弧菌的发现为研究用生物方法制备新型纳米磁性材料提供了必要的基础     

海洋弧菌多样性

海洋弧菌泛指异营性、好盐性、兼性嫌气性革兰氏阴性杆菌中,具有发酵葡萄糖等醣类能力者。它们遍布于内湾、沿岸和大洋水域及海底沉积物,也遍布于形形色色海洋生物体表和体内。这类细菌中,有少数种类是海洋鱼类和无脊椎动物特化发光器官内共生者,另有许多其它种类是人类和海洋动物病原体。海洋弧茵具有各类物质分解能力,包括能降解几丁质、洋菜等复杂多醣类,因而可能在沿岸环境有机物质循环再生中,扮演重要角色。这类细菌的固氮作用,可能是海洋环境中氨态氮重要来源之一。16S rDNA序列之亲源分析显示,海洋弧菌隶属γ-Proteobacteria。七十多种海洋弧菌目前被归类于Enreovibrio、Grimontia、Photobacterium、Salinovibrio和Vibrio五属;前两属属于Enterovibrionaceae,后三属分别属于Photobacteriaceae、Salinovibrionaceae和Vibrionaceae。利用限制型分析于区分16S rDNA基因型,是一种简易快速,而又有效于遂行海洋弧菌分离株初步分类的方法。     

海洋弧菌Z010产生几丁质酶的发酵条件研究

以海洋弧菌Ｚ０１０菌株为对象,研究了其产生几丁质酶的发酵条件。研究表明,其产酶的最佳发酵条件为：２２１６Ｅ液体培养基中含０．５％（ｗ／ｖ）的胶体几丁质,０．５％（ｗ／ｖ）的蛋白胨,培养起始ｐＨ值为７．０,２５℃摇床２００ｒ／ｍｉｎ培养３６ｈ,几丁质酶产出最大。