斜带石斑鱼TLR5S基因结构及功能分析

Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)可溶型TLR5(ECTLR5S)cDNA全长序列(Genbank登录号:GQ396667).其cDNA序列全长2 439bp,包括69bp的5′UTR,435bp的3′UTR和1 935bp的开放阅读框,共编码644个氨基酸,预测编码蛋白质分子质量为72.28ku,等电点为6.37.将ECTLR5S基因氨基酸序列与其他脊椎动物的TLR5S基因氨基酸序列进行比对,结果显示出很高的相似性,其中与牙鲆相似度可达69%.Real time PCR检测结果显示ECTLR5S基因在斜带石斑鱼不同器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,其次是脾脏、血淋巴、肾脏等.Realtime PCR检测ECTLR5S基因在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染3,6,12,24,48h后的肝脏中表达情况,结果显示ECTLR5S基因在3,6,12,24h时表达量显著上调(p<0.05),而在48h下降至初始水平.这些结果说明ECTLR5S基因可能参与到斜带石斑鱼抗弧菌感染的免疫反应中,并且肝脏是其发挥作用的重要器官.     

微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

鱼类鳗弧菌6种毒力基因探针氨基玻片制作条件的初步构建

本文用玻璃作为片基,对其进行氨基修饰,将鳗弧菌6个毒力基因的寡核苷酸探针用微量移液器点样于氨基玻片表面,制备探针氨基玻片。制备好的探针玻片与6个毒力基因的地高辛标记的PCR产物进行杂交。本实验初步构建了探针氨基玻片的制备方法,同时实验结果还表明在PCR产物的标记及检测方法上仍然需要进一步的研究。     

网箱养殖石斑鱼暴发性溃疡病病原菌分离、鉴定及致病性研究

调查了1996～1998年海南省各地网箱养殖石斑鱼暴发性溃疡病的病症、流行特点,通过细菌学常规鉴定和人工感染以及重复感染试验,初步确认病原菌为溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus),并研究其生理生化特性．     

南海珠江口区域水生病原弧菌的分离鉴定及血清学分析

从南海珠江口之深圳、珠海海域和广州城区等五个不同区域的9个水样中,利用弧菌属选择性培养基TCBS获得9类特征菌落表型的分离株.选取高频率出现的4类典型菌落的代表菌株(G,Y1,Y2,T)鉴定,革兰氏染色为G-,磷钨酸负染色透射电镜观察菌体细胞成短棒状或弯曲弧状,可见单极生鞭毛.综合特征生化鉴定结果确定橙黄色菌株Y2为霍乱弧菌,绿色菌株G为嗜盐性副溶血弧菌.血清学类群分布研究结果表明来自于不同水域样本的菌株之间存在特征血清型的显著关联性.     

弧菌广谱性外膜蛋白抗原筛选及其单抗的交叉免疫原性研究

采用生物信息学方法分析几种病原性弧菌OmpK、OmpU和OmpW蛋白种间和种内的同源性,筛选高保守性蛋白OmpW.成功构建具备稳定分泌抗体IgG3的细胞株S5C10,鉴定其对5种弧菌具有特异性交叉免疫反应,而对9种非弧菌无免疫反应.研究结果显示OmpW可作为广谱性疫苗成分,其单抗可特异性检测多元弧菌.     

部分重金属与酚类混合物对淡水发光菌的毒性研究

应用微板毒性分析方法,分别测定了CdCl2.2.5H2O、CoSO4.5H2O、Cu（NO3）2.3H2O、Fe（NO3）3.3H2O、ZnSO4.7H2O、Ni（NO3）2.6H2O6种重金属化合物和苯酚、邻甲基苯酚、间甲基苯酚、邻硝基苯酚及间硝基苯酚5种酚类化合物对淡水发光菌——青海弧菌Q67的抑制毒性,设计了EE-50（等EC50）、EE-10（等EC10）、EE-05（等EC05）3个等效应浓度比混合物,应用剂量加和（DA）与独立作用（IA）原理分析混合物的毒性。     

成虾发光病病原体的分离鉴定及防治技术研究

成虾养殖中也经常发生发光病，危害同样十分严重．研究证明，哈维氏弧菌(Vibroharveyi)也是成虾发光病的主要致病菌．注射、投喂、创伤、浸泡等几种感染方式都会造成对虾大量死亡，但感染速度和发光程度有明显的差别．侵入虾体内的发光菌的数量对对虾的成活率有明显的影响．致病菌与幼苗发光病的药物敏感性相似，仅对少数药物敏感，2种药饵可减少损失率，但防治工作应以预防为主，综合处理．     

Overexpression and export of Vibrio anguillarum metalloprotease in Escherichia coil

Vibrio anguillarum metalloprotease, an extracellular zinc metalloprotease involved in the virulence mechanism of Vibrio anguillarum, is synthesized from the empA gene as a 611-residue precursor and naturally secreted via Sec secretion pathway in Vibrio anguillarum. In this study, hetemlogous expression of the empA gene encoding metallopmtease and export of the recombinant metallopmtease in Escherichia coli were examined. The empA gene was subcloned into pBAD24 with arabinose promoter and sequenced. The sequence encoded a polypeptide （611 amino acids） consisting of four domains： a signal peptide, an Nterminal pmpoptide, a mature region and a C-terminal pmpoptide. The empA gene inserted in plasmid pBAD24 was overexpressed in TOP10 strain of E. coli after arabinose induction. The 36kDa polypeptide of the recombinant metallopmtease as the mature pmtease was further confirmed by SDS-PAGE and im- munoblotting. It was found that recombinant metallopmtease with the EmpA activity and antigenicity was exported into the poriplasm of Escherichia coli cells via Sec translocation pathway, whereas it was secreted into extracellular environments in V. anguillarum. The results imply that the expression, export and processing mechanism of the protein in E. coli are similar to those in V. anguillarum.     

舍曲林对副溶血弧菌的抑制作用

近年来关于副溶血弧菌环境和海产品分离株出现抗生素耐药性的报道日益增多,亟需寻找替代传统抗菌剂抗菌的策略以控制副溶血弧菌的污染和感染。本研究通过最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的测定、生长曲线的绘制,以及运动性实验和结晶紫染色实验,并利用透射电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估以舍曲林为代表的5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）类药物对副溶血弧菌的抑制活性及抗生物被膜形成能力。同时,通过检测与分析舍曲林对副溶血弧菌毒力基因转录的影响,探究舍曲林对副溶血弧菌的减毒作用。结果显示,舍曲林对副溶血弧菌的MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL,能够损伤其细胞膜和细胞壁,MIC下导致其干瘪皱缩,MBC下引起其涨裂、胞内物质外泄;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的泳动和群集运动,抑制率分别为88.6%和71.5%;舍曲林呈浓度依赖性地抑制副溶血弧菌的生物被膜形成,当舍曲林质量浓度分别为8、16、32和64μg/mL时,对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率分别为66.9%、79.5%、88.3%和89.3%;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的毒力基因fliA、ompW和a...