破囊壶菌Δ4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定

应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.     

免疫PCR技术的策略

免疫PCR是一种新兴的免疫标记技术，具有高敏感性和特异性的特点．本文对免疫PCR的方法、DNA标记探针的构建及扩增产物的检测进行了综述．     

牛α—s1酪蛋白基因3‘端DNA的PCR扩增,克隆及鉴定

本研究以牛血总ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增牛α－ｓ１酪蛋白基因的５＇端３．６ｋｂＤＮＡ片段和３＇端１．５ｋｂＤＮＡ片段的调控区序列，得到了相应的特异性扩增片段．用Ｋｌｅｎｏｗ处理后，将两个扩增片段分别与经Ｓｍａｌ酶切的ｐＵＣ１８质粒载体用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＪＭ１０９．在含有Ｘ－ｇａｌ，ＩＰＴＧ和Ａｍｐ的选择培养基上培养．从白色菌落中提取质粒ＤＮＡ，进行限制酶切鉴定．结果得到一个插入有１．３ｋｂＤＮＡ片段的阳性克隆．对其进行部分序列分析表明，该片段为５＇端缺失约１７０ｂｐ的牛α－ｓ１酪蛋白基因３＇端及下游区序列．     

食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

运用实时荧光PCR(Real-time PCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法，设计的引物和探针的序列特异性强，省去凝胶电泳的繁琐，降低了污染的可能性，在对26种病原菌进行检测过程中，运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较，结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌，更快速、敏感、特异性更高。     

水杉木材DNA提取及条形码分子鉴定

通过对水杉不同年限及不同部位的木材DNA提取及片段扩增实验,结果显示改良后的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、SDS (sodium dodecyl sulfate)法及高盐低pH法均可以用于水杉木材DNA的提取,经过纯化后的木材DNA可以进行片段扩增.在提取木材DNA过程中,边材比心材更适合,所提取的DNA数量和质...     

PCR扩增ZFY及ZFX基因对奶牛的性别鉴定

根据人及鼠 ZFY 及 ZFX 基因设计一对引物(ZF_1;ZF_2),利用 PCR 方法对牛的ZFY 及 ZFX 基因进行扩增.将扩增片段用 RStI 酶切,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后判定牛的性别.公牛 ZFY 基因的 PCR 扩增片段有一个 RStI 酶切位点,ZFX 基因没有 PSTI 酶切位点.所以公牛的 PCR 片段经酶切后出现三个片段(468bp;356bp;112bp).而母牛的 PCR 扩增片段酶切后仍只有一个片段(468bp).据此就可区别雌雄性别.     

PRV广东株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定

根据伪狂犬病病毒（PRV）Rice株gE基因的序列设计并合成了1对引物,以我国PRV地方毒株广东株的基因组DNA为模板,通过PCR方法获得了一大小约1.6kb的DNA片段,并将其克隆到pMD18-T载体上进行测序,序列测定结果显示,该片段长1665bp,编码555个氨基酸,与PRV Rice株gE基因的核苷酸序列同源性为97.7%,氨基酸序列同源性为95.9%。     

聚合酶链式反应（PCR）技术研究新进展

聚合酶链式反应(PCR)在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用．文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述,其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用．     

结合PCR扩增快速筛选鉴定重组质粒

针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆（重组质粒），本在实验室研究的基础上，创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法，用和Triton裂解液裂解菌落，离心后上清作为模板，再用特异引物进行PCR扩增，2h就可以得出结果，本方法具有节约省时，重复性好，结果直观，准确等优点，这为从事分子生物学研究的实验室快速筛选阳性克隆提供了方便。     

马鹿生长激素基因的克隆与5′侧翼序列分析

根据报道的哺乳动物GH基因序列设计引物，首次利用PCR方法扩增和克隆了马鹿GH基因，该基因大小约为1．8kb，对该基因上游340bp核苷酸测序及分析表明，测序区域包括5′侧翼序列，第一外显子和部分第一内含子，第一外显子所编码的所有氨基酸与猪的相比完全相同，初步认为GH基因在马鹿基因组中为单基因，该测序区域与已报道动物GH基因相比是高度保守的。