Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma by Using Methylation Specific-PCR

To find a more sensitive and earlier diagnostic marker for hepatocellular carcinoma, methylation-profils of CpG islands in the promoter of eleven genes in hepatocellular carcinoma（HCC） carcinoma and pericarcinoma tissues from ten patients were examined by using methylation-specific PCR （MSP） method. MSP was used to detect the methylation of p16, p53, Secreted frizzled-related protein 1 （SFRP 1） and SFRP2 promoters. Meanwhile, plasma alpha-fetoprotein （AFP） levels in 53 patients were also determined. The results showed that HCC was closely correlated to methylation in promoter of tumor-suppressing gene p16, p53, SFRP1 and SFRP2. The results suggest that methylation of SFRP2 promoter is possible a better marker for diagnosis of HCC than plasma Alpha-fetoprotein （AFP） levels. The false negative of SFRP1 and SFRP2 are perfectly complementary. If SFRP1 and SFRP2 were both considered as a complementary positive marker at the same time, the accurate rate for diagnosis of HCC is 100%.     

面向生物工程实验的微操作机器人

本文讨论了一台面向生物工程应用的微操作机器人系统的结构、功能和关键技术．首先，给出了它的硬件体系结构和逻辑结构，它由传感系统，控制系统和操作系统组成．其中传感系统由显微镜和ＣＣＤ摄象系统组成．其次，对微操作机器人系统的关键技术进行详细讨论．显微视觉是最主要的一项技术，基于此技术完成了两项功能，即微针的纵向定位和自动寻针．最后，给出了微操作机器人在生物ＰＣＲ反应实验中的一个成功的应用实例，证明了上述系统的有效性．     

用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

摘要建立了一个用于转基因小苗检测的DNA快速微量方法.每20mg新鲜叶片可提出约10μgDNA，且DNA有较好的完整性，A260/280值在1.7～1.9范围内，并适合于点杂交和PCR分析.     

C57小鼠胸腺和睾丸中mPer1基因启动子区CpGs甲基化分析

利用实时定量PCR方法检测胸腺和睾丸组织中mper1基因表达时相特点,采用亚硫氢酸修饰法对两种组织两个时间点该基因2个启动子区域5个E-box CpGs甲基化情况进行研究.结果显示:C57 BL/6J小鼠胸腺和睾丸组织中mPer1基因表达没有显著波动性,mPer1基因启动子区CpGs呈低甲基化状态(<10%).两种组织中E3和E4甲基化频率存在显著差异(P<0.01).在睾丸中,不同时间点E3和E4甲基化频率有显著变化(P<0.01).说明在睾丸中,mPer1启动子E-box3的甲基化状态能够随时间波动.但在胸腺和睾丸中,甲基化并不是mPer1基因调节的主要方式.     

水稻成熟花粉cDNA文库的构建与分析

以λTriPIEx2^TM为载体，采用RT-PCR技术，构建了水稻成熟花粉的cDNA文库，此文库的滴度为1.2X1010pfu/mL，含插入片段的频率为97%，插入片段的大小为400bp-2500bp。     

用PCR方法检测土壤中类鼻疽假单胞菌的研究

目的建立一种灵敏、特异的检测土壤中类鼻疽假单胞菌的聚合酶链反应(PCR)方法.方法用类鼻疽假单胞菌鞭毛蛋白的基因作引物,用PCR扩增的方法检测6种土壤中不同浓度的类鼻疽假单胞菌和3个假单胞菌属的3种对照菌.结果用鞭毛蛋白基因作引物的PCR方法具有高灵敏度,其他3种对照结果阴性.结论用类鼻疽假单胞菌鞭毛蛋白基因作引物建立的PCR方法为检测土壤中类鼻疽假单胞菌提供了科学依据.     

亚洲一型口蹄疫病毒YNAs1.1株结构蛋白VP1基因的核苷酸序列分析

提取BHK21细胞增殖的亚洲一型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus Serotype Asial)强毒株YNAs1.1的RNA,用一对引物P7,P13经反转录（RT）－PCR法扩增了约674bp的DNA片段。克隆目的基因后,采用双脱氧DNA链末端终止法测得了YNAs1.1的VP1基因36－633核苷酸序列。分析表明,病毒VP1基因的核苷酸序列与以色列以及印度已报道的Asia1型FMDV的同源性分别为82.11%与88.07%,对应的氨基酸序列同源性为87.94％与93.47％。该序列在GeneBank登陆号为AF241566。     

导向溶栓分子scFv—UK32中连接钛的引入和在昆虫细胞中的表达

为了提高重组导向溶栓分子scFv-UK32的溶纤活性,通过重组PCR方法在编码scFv与UK32的碱基之间引入编码KLGGGG连接肽的碱基序列,并克隆到转移载体pBacPAK9上,通过与线性病毒DNA BacPAK6/Bsu361 digest共转染到昆虫细胞Sf 9内,进行表达。表达产物分泌到上清中,共转染后第5d（天）用纤维平板法测得Sf 9细胞上清溶纤活性达到107IU/mL,比未引入连接肽的scFv-UK32的表达活性（25IU/mL）高。,ELISA实验表明共转染上清具有明显对活化血小板特异结合能力,Western Blotting实验表明共转染上清可与Pro-UK的单抗特异结合。     

二甲亚砜在聚合酶链反应扩增载脂蛋白E基因中的作用

目的：探讨二甲亚砜（DMSO）在聚合酶链反应（PCR）中扩增人类载脂蛋白E基因中的作用。方法：在不同质量分数DMSO的存在下,以PCR技术增人类载脂蛋白E基因片段。限制性内切酶酶切检测扩增产物。结果：在质量在分数5%-10%的DMSO下,可以成功地扩增到人类载脂蛋白E基因的第4外显子片段。结论：在DMSO作用下,PCR扩增增强了特异性。扩增的人类载脂蛋白E基因片段可以进行基因限制性片段多态性的分析。     

TTV感染的检测及意义

目的：探讨本地区不同型别肝炎患者血清中TTV感染状况。方法：采用巢式PCR对97例不同型别肝炎患者血清中TTVDNA进行检测。结果：对97例不同肝炎患者血清中TTV检测,其阳性率慢性乙型肝炎为6.0%,慢性丙型肝炎为24.0%,非甲-庚型肝炎为18.1%。结论：采用巢式PCR对不同型别肝炎患者血清中TTVDNA进行检测。为本地区TTV肝炎的诊断和治疗提供实验诊断方法,具有一定的指导意义。