4种促性腺激素释放激素抗体的制备、鉴定和纯化

用3-马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯(MBS)法将人工合成的4种不同来源的促性腺激素释放激(GnRH)(即章鱼GnRH、海鞘GnRH-Ⅰ、七鳃鳗GnRH-Ⅰ和七鳃鳗GnRH-Ⅲ)分别与匙孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原,免疫新西兰大白兔获得GnRH抗体.用间接ELISA方法检测抗血清效价,并用Western blot鉴定其特异性.制备抗原肽亲和纯化柱,纯化多克隆抗体.结果显示,4种多克隆抗体效价高达1∶500 000(体积比),并能和相应的GnRH多肽特异性结合,纯化后的抗体在SDS-PAGE显示为单一条带.通过上述方法,获得4种高效价、高纯度的GnRH抗体,为低等动物GnRH的研究提供了理论依据.     

鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine Proteinase,CSP).性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的I型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.     

一个描述GAV-9肽在不同pH值环境下界面水层中自组装行为的模型

pH值在很多生物过程中起到了重要作用,不仅在溶液中,在界面环境中也是如此.研究了GAV-9肽在酸性和碱性氛围下界面水层中的自组装行为.发现GAV-9肽在酸性氛围下自组装得到有序的纳米细丝,但在碱性氛围下自组装得到无序的纳米片层.此外,体相实验显示,GAV-9肽在中性和碱性溶液中自组装得到有序的纳米细丝,但在酸性溶液中未在云母表面吸附.基于此结论,提出以下模型:在中性和酸性氛围下,GAV-9肽是在固液界面上进行自组装的;在碱性氛围下,GAV-9肽是在气液界面上进行自组装的.     

荒漠肉苁蓉总苷大孔吸附树脂纯化工艺

目的:优化大孔吸附树脂分离纯化荒漠肉苁蓉总苷的工艺条件.方法:通过比较6种不同型号大孔吸附树脂的吸附、解吸能力及回收率,优选出较佳的树脂.对优选的较佳树脂纯化荒漠肉苁蓉总苷的工艺,采用L_9(3~4)正交设计优化.结果:D-101为纯化的较佳树脂,上样液浓度2.0mg·mL~(-1),上样液流速2 mL·min~(-1),洗脱液体积6 BV为较佳吸附条件.该条件下纯化后总苷含量达64.38%,为纯化前的28.85倍.结论:D-101树脂对荒漠肉苁蓉总苷纯化效果良好,该工艺稳定,可行性高.     

黑色葡萄状穗霉纤维素酶的纯化和性质

将筛选所得的黑色葡萄状穗霉（Stachybotrys atra)S607发酵培养96h，发酵液离心去除菌体，上清液经超滤、Sephadex-G100柱层析、DEAE－Sepharose fast flow弱阴离子交换层析、CM－Sepharose fast flow阳离子交换层析、Q－Sepharose fast flow强阴离子交换层析及置换层析等步骤，得到了4种电脉纯的酶组分，即内切纤维素酶EGⅠ、EGⅡ、EGⅢ和β葡萄糖苷酶（βGase）。利用SDS－PAGE测得4种酶组分的分子量分别是78.3、58.1、72.4和55.6kDa。3种内切酶组分的最适温度都是50℃，β葡萄糖苷酶为55℃，它们的最适pH值分别是6.0、7.0、6.5和6.0。底物专一性的实验表明，内切酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ都可作用于木聚糖。     

T细胞对不同配体的鉴别模型

T淋巴细胞对抗原多肽的免疫应答是免疫系统的重要事件,T细胞对于分辨不同的MHC－pep复合物有着不同寻常的能力,抗原多肽上信号氨基酸部分的细小判别,将有效的引起截然不同的T细胞响应,有些可以激活T细胞,而另外一些却抑制了细胞的活化,此模型深入考虑了PTK的活性及TCP与其配体的亲和力,将早期信号事件与决定了T细胞活化的持续信号联系了起来,为T细胞对不同配体的免疫应答提供了一个合理的理论解释。     

具有抗艾滋病毒活性的多肽T22([T5,12yr,L7yr]-PolyphemusinⅡ)骨架构象模拟

用势能平滑搜索方法,在平滑修饰的势能面上对具有抗艾滋病毒HIV－1活性的肽T22（[Tyr^5,12,Tyr^7]-PolyphemusinⅡ）骨架结构进行了全程搜索,得到了该分子骨加结构在修饰势能面上的分子构象全集。用多构象优化方法,选择较适用于肽OPLS力场,采用GB／SA水溶剂模型,优化上述构象集,得到T22骨架结构在水溶液中优势构象集。结果表明势能平滑搜索与多构象优化相结合的构象分析方法是解决含有环结构的柔性分子构象分析中多重最小问题的有效方法。     

Q Sepharose F.F.层析柱的制备及BTI的初步纯化

通过对Q Sepharose F．F．离子柱的制备及荞麦蛋白酶抑制剂(BTI)的初步纯化，探索用自制层析柱代替价格昂贵的预装柱来分离纯化生物活性物质的可能性．实验结果表明：自制的Q Sepharose F．F．强阴离子层析柱可以满足对目的产品进行分离纯化的实验要求，同时与购买的预装柱比较，自装柱具有较大的上样量，柱体积灵活可变以及低成本等特点．     

MCUR1蛋白的表达纯化以及晶体初筛

Mitochondrial Ca~(2+)Uniporter(MCU)是线粒体钙离子通道的一个主要成分.近期研究发现Mitochondrial calcium uniporter regulator 1(MCUR1)是MCU的一个调节蛋白.研究通过合成人源的MCUR1基因,利用PCR得到目的DNA片段,克隆到表达载体PET.32a,构建Trx-MCUR1融合蛋白表达质粒PET.32aMCUR1.克隆质粒转化表达菌E.coli BL21(DE3)Condon Plus,经IPTG诱导表达.将得到的融合蛋白经过镍亲和层析柱进行初步纯化,然后加入PreScission酶分离目的蛋白与标签,再用离子柱和分子筛层析进行进一步的纯化以去除标签以及杂蛋白.浓缩纯化后的目的蛋白,进行晶体初筛以及后期的晶体优化.最后将生长的晶体进行初步的X射线衍射分析.     

膜分离技术在生化产品制备中的应用

综述了超滤、纳滤和微滤等几种膜分离技术在生化产品分离纯化中的应用现状，以及膜分离技术应用于生化产品制备现存的问题。膜分离技术是一项新兴的物质分离浓缩技术，分离纯化生化产品效果较好，选用更佳的膜材料以及多种膜分离技术连用是其今后的发展方向。