HBs和HCVc基因双顺反子质粒在BALB/c小鼠体内的分布

 采用注射含双顺反子质粒后,PCR法扩增不同组织中HBsAg和HCVc基因,同时检测HBV和HCV抗体应答水平.研究注射基因免疫用双顺反子质粒在小鼠组织中的分布.pcDNA3.0BApc154S₂S 1次注射BALB/c小鼠后,24 h内主要分布于血液、肝、脾、骨髓、淋巴结、注射部位肌肉、肺和肾等含血液丰富的组织中.注射后2 d主要在骨髓、血液和注射部位肌肉中存在.7 d后仅在注射部位肌肉中能检测出来,并可持续到第9周.组织切片镜检质粒注射初期肌肉细胞轻度浊肿,随后肌膜细胞轻度增生,未见其它明显的组织病理学变化.质粒多次免疫BALB/c小鼠未见明显的临床症状和病理组织学变化.质粒在小鼠体内不同组织存在时间不一致.     

SARS-CoV灭活疫苗制备及小鼠免疫研究

用Vero细胞大量增殖SARS-CoV病毒, 使用β-丙内酯作为灭活剂灭活病毒后, 用Sepharose 4 FF层析柱纯化病毒颗粒得到灭活疫苗, 并经Western-blot, 质谱, ELISA和电子显微镜检测证实. 用纯化的灭活疫苗加入或不加入氢氧化铝佐剂, 以不同的剂量免疫小鼠, 能够诱导小鼠产生抗体, 加入氢氧化铝佐剂组所产生的抗体高于不加入佐剂组.     

从草鱼内脏制取抗氧化活性饲用多肽粉的工艺研究

采用热水自溶法水解草鱼内脏,从中分离出水解产物,然后将其干燥制作成饲用多肽粉.研究了水解工艺条件对草鱼内脏水解的影响,测定了水解液和干燥后的多肽粉的抗氧化活性.结果表明,当自溶温度为60℃,自溶时间为75 min,每100 g内脏匀浆加水60 mL时,草鱼内脏的油脂提取率为70.05%.此时,内脏水解液的自由基清除率高于72%.水解液经过干燥后,其理化组成符合国家一级饲用鱼粉标准.热风干燥的饲用多肽粉的自由基清除率高于喷雾干燥多肽粉.     

结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗的构建及表达

构建结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗,并对其在体外真核细胞中进行表达。用EcoRV和Hindm双酶切合HSP65-IL-2融合基因的pPaO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断HSP65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的真核表达载体pcDNA3．1（-）中,重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体瞬时转染COS-7细胞,并通过间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。重组真核表达质粒酶切后可获得约2067bp的融合基因HSP65-IL-2片段,间接免疫荧光检测重组质粒转染的COS-7细胞,可在细胞胞浆中看到特异性的绿色荧光。成功地构建了结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因的真核表达载体,且该重组载体可在体外真核细胞中获得特异性的表达。     

虎纹捕鸟蛛毒素HWTX -Ⅰ和芋螺毒素MVIIA嵌合体的固相化学合成

采用Fmoc固相合成的方法,将来自芋螺的ω-芋螺毒素(ω-Conotoxin) MVIIA (N-型钙离子通道阻断剂)中已知活性位点及可能的相关序列嵌入虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX -Ⅰ) 的非活性位点区,代替其相应序列,构建同时携带两种活性位点的多肽嵌合体.嵌合体用 MALDI-TOF质谱鉴定.通过RP-HPLC检测其氧化复性过程,摸索出嵌合体的最佳复性条件.经过两次RP-HPLC脱盐纯化.结果表明,设计合成的嵌合体在1×10-5g/mL,利用小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验证明嵌合体显示了27 %的天然HWTX-Ⅰ的神经毒活性.实验结果表明,HWTX -Ⅰ具有蛋白质工程改造前景.     

大规模网络中基于HDHT的病毒疫苗分发算法

目前,反病毒系统防御病毒的主要方法是依靠反病毒中心服务器定期更新各个节点上的病毒定义文件和安装系统补丁,这种被动应对策略常常不够及时,且容易使服务器节点成为系统的性能瓶颈,具有较大的滞后性,也不能适应大规模网络系统。针对大规模网络环境提出了一种高效的基于层次式分布散列表(hierarchical distributed Hash table, HDHT)的反病毒疫苗分发算法。算法基于一种新型层次式分布散列表网络拓扑结构HDHT,利用网络边缘节点直接通信来提高病毒疫苗分发效率,从而有效分担服务器负载。为了增强算法的性能,算法还引入一种简洁的节点信誉评估机制。从分发效率、系统开销等方面,对病毒疫苗分发算法的性能进行实验验证和性能分析。结论表明,该算法可有效实现病毒疫苗在网络中快速分发和部署,同时减轻了网络和服务器的负载。     

血管紧张素Ⅱ及其自旋标记物的合成、生物活性和顺磁共振的研究

血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AugⅡ)是肾素-血管紧张素系统(RAS)中的重要成分,在肾脏RAS中,肝脏生成的一种α_2球蛋白,即血管紧张素原,通过肾小球旁细胞分泌的一种蛋白水解酶肾素的作用,成为10肽血管紧张素Ⅰ(AngⅠ),再通过血管紧张素转化酶的作用去掉两个氨基酸(His-Leu)成了强活性的8肽AugⅡ,其氨基酸序列为:DRVYIHPF.AugⅡ可与相应受体结合引发多种生理效应.自旋标记方法为生物学研究提供了有效手段,有些顺磁性基团自身结构功能也对被标记分子的结构发生影响,被认为是双功能基团.     

鳖用四价细菌灭活疫苗免疫防治应用研究

将分离自中华鳖主要细菌性疾病如肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株不同血清型的温和气单胞菌,用3.5%福尔马林溶液处理24 h灭活并添加蜂胶作为佐剂,制成总含菌量为6×109CFU/mL的四价菌苗。同时制备了针对中华鳖IgM的单克隆抗体3H3,并建立了由单抗3H3介导的三抗体夹心ELISA（TAS-ELISA）方法对四价菌苗的免疫效果进行评价。将研制的四价菌苗小批量免疫健康中华鳖,分别于免疫前及免疫后的100 d内,随机采集3只免疫组和1只对照组的中华鳖血清,利用所建立的TAS-ELISA测定血清中抗体ELISA效价。将免疫50 d的中华鳖分成4组,分别用4株病原菌以5LD5（09×106CFU/mL）进行攻毒,并用上述制备的四价疫苗进行免疫预防试验。结果显示：当中华鳖免疫后40 d,血清中抗体ELISA效价最高,为1：（1.28×104）;中华鳖免疫后50 d,其免疫保护率均达到100%,同时对照组死亡率为100%。结果表明：以蜂胶为佐剂的鳖用四价细菌灭活疫苗所开展的免疫预防试验取得了良好的免疫效果,能有效地预防养殖鳖类主要病害的发生。