全长基因的克隆

新基因全长cDNA序列、全长DNA序列的获得常常是分子生物学工作者面临的难题。本文就克隆全长基因的各种技术如文库筛选法、各种PCR技术及新发展起来的电子克隆法等方法作一简单综述。     

大肠杆菌O157:H7基因组研究进展

对大肠杆菌O157：H7基因组的结构、特点等近年来的研究进展进行了综述。     

His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化

用构建的带有His—Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm—BacPAK6—pgh研究了Bm—BacPAK6—pgh在家蚕细胞(Bm—N)和蚕体内的表达，并对蚕体表达产物进行了纯化．SDS—PAGE电泳分析显示，重组病毒Bin—BacPAK6—pgh在Bin—N细胞、蚕体中得到了融合表达，Western blot分析表明，Bm—N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性．Bm-BacPAK6-pgh在Bin—N细胞内的表达始于24h，而蚕体中的表达始于72h，二者的表达峰分别在96h和120h．经40％饱和度硫酸铵盐析和Ni—NTA Agarose亲和柱二步纯化可获得SDS—PA(正电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白。     

布依族7项不对称行为特征的研究

对布依族的7项不对称行为特征(利手、扣手、叠臂、叠腿、利足、起步和利眼)进行了调查，结果显示：(1)7项指标在布依族中的出现率R型(右型)远高于L型(左型)；(2)布依族中7项指标出现率均无性别间差异；(3)与蒙古族、朝鲜族、汉族、鄂温克族、鄂伦春族、达斡尔族、汉族等民族作比较，发现布依族各项指标L型出现率偏低，且扣手、叠臂、起步L型出现率和这6个民族存在极显著性差异，叠腿L型出现率除与鄂伦春族无差异外，与另外5个民族均有极显著性差异，其他指标与这6个民族基本不存在差异；(4)布依族扣手基因频率(％)为：A=0．1653，a=0．8347；布依族利手基因频率为：B=0．6990，b=0．3010；(5)统计分析了7项指标间的相关性，发现多数指标间存在相关性，部分指标相关极显著，且R—R型组合(右型一右型)的出现频率远高于L—L型组合(左型一左型)的出现频率．     

小麦近缘种及小麦-簇毛麦染色体代换系、易位系的SSR分析

用20对小麦微卫星引物，对小麦近缘种和小麦-簇毛麦染色体代换系、易位系的基因组DNA进行PCR扩增，14对引物有扩增产物，其中10对引物可以在小麦近缘种间扩增出多态性标记．共扩增出分子量小于500的条带477条，其中342条具有多态性，每个SSR座位的等位基因数目在2～6个之间，平均为3．7个．11个实验材料的基因多态性(PIC)范围在0．4013～0．7281之间，平均为0．5725．根据NeiM的方法进行遗传距离分析，构建系统树，确立小麦及近缘种的亲缘关系，为麦类作物遗传资源的研究及在育种中的应用提供一些理论依据．     

水稻条斑病细菌（Xanthomonas oryzae pv．oryzicola）Wzt基因参与LPS O-抗原合成和影响细菌致病性

ABC-转运系统将同质O抗原多糖链从细胞质内膜转运到细胞周质空间合成脂多糖(LPS)．通过功能互补和亚克隆序列分析在X．oryzae 　pv．oryzicola的基因组文库中发现了一个Wzt基因，该基因编码产物是运输O-抗原的ABC-转运系统的疏水组成部分,为ATP-结合蛋白．为区别基因来源将该基因命名为Wzt_Xooc．Wzt_Xooc编码一个35．9ku的蛋白质．通过分析发现,Wzt_Xooc与数据库中的其他细菌包括水稻白叶枯病菌的ABC转运系统的ATP结合蛋白质不同．在WztXooc序列中仅发现ATP-结合蛋白中4个保守基序的3个，没有发现ATP-结合位点Walker A（ATP/GTP binding site motif A）． 通过基因插入突变得到Wzt_Xooc基因突变体Mwzt．LPS分析表明：由于该基因突变使O-抗原链不能转运通过细胞质膜，不能形成完整的LPS分子,突变体菌落表面丧失了产生大量胞外多糖的能力；突变细菌不产生鞭毛，丧失了游动性和生物膜形成的能力．重要的是突变体在水稻上的繁殖能力和致病性明显下降，证明Wzt_Xooc基因与LPS合成及致病性有关．     

论应用多基因转化策略综合改良生物体遗传性研究方向的前景Ⅱ.多基因转化策略中的规律、前景和问题

随着后基因组时代的到来,人类将克隆到越来越多的、生物学意义明确的有用基因应用于基因工程对生物体的遗传改良中.但生物体的绝大多数性状和生理功能都是依靠多基因的协调表达而实现的.因此,多基因转化策略必将成为今后基因工程在基础理论与实际应用研究中的主流方向.综述了近年来中山大学生物工程研究中心∥基因工程教育部重点实验室在多基因改良农作物方面的研究工作和进展,分析了多基因转化中的基本规律和存在的问题,最后对多基因转化策略在未来的应用前景作出了简要的展望.     

两个新的粟酒裂殖酵母box H/ACA snoRNA的鉴定、功能分析及进化意义

通过构建粟酒裂殖酵母核小分子RNA的cDNA文库,发现并鉴定了两个新的非编码RNA,分别命名为Sp15-70和Sp18-61.生物信息学分析揭示这两个RNA均具有典型的box H/ACA snoRNA二级结构特征和与rRNA互补的配对区,推测Sp15-70具有指导25S rRNA中U2401和U2298假尿嘧啶修饰的功能;Sp18-61具有指导18S rRNA中U208和25S rRNA中U2341假尿嘧啶修饰的功能.采用CMC-引物延伸法证实:在粟酒裂殖酵母rRNA中,这4个预测位点确实为假尿嘧啶修饰核苷酸.Sp15-70和Sp18-61均由单拷贝基因编码,分别位于粟酒裂殖酵母染色体工和Ⅲ上蛋白质基因的间隔区,在其5'端上游均发现了典型的TATA box元件,表明它们都是独立转录的基因.比较分析这两个snoRNA在不同生物中的功能性同源分子,发现snoRNA基因在进化的过程中发生了广泛的分子重组和转位.     

当代生命科学研究的新成果

简要介绍了当代生命科学研究取得的新成果，包括揭示泥菌生理奥秘、实现哺乳动物单亲无精生殖、发现戒毒瘾蛋白质、实现基因替代。     

生命科学研究的若干重大进展

简要介绍了生命科学研究的若干重大进展,包括我国基因剔除技术获重大突破、小麦小染色体研究取得重大进展、利用基因工程技术制造新的微生物以及脊椎神经生长开发将使残疾人恢复肢体运动等.