结构域对小麦蛋白质二硫键异构酶性质的影响

小麦蛋白质二硫键异构酶（wPDI）由4个硫氧还蛋白结构域a-b-b’-a’和C-末端c尾组成。为考察wPDI各结构域对其活性的影响,本研究通过亚克隆表达了八个不同结构域组成的wPDI截短蛋白,表达产物经分离纯化后进行了酶学性质研究和蛋白质电泳分析。结果表明,设计的八个wPDI截短蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中得到了表达,金属螯合亲和层析和分子排阻层析后获得了纯度较高的wPDI截短蛋白;活性测定结果表明,wPDI的所由结构域对其二硫键氧化还原活性和分子伴侣活性都有贡献,c尾不影响其异构活性,但提供了分子伴侣活性的关键氨基酸结合位点;对截短蛋白A和A’的电泳分析发现,wPDI的a结构域活性位点主要以氧化态为主,而a’主要以还原态为主。研究结果为深入理解wPDI的功能性质奠定了基础。     

β-淀粉样蛋白基元序列寡聚化及纤维化的功能研究

【目的】β-淀粉样蛋白形成的寡聚体是引起阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)发病的主要原因之一,研究β-淀粉样蛋白各段序列在寡聚和纤维化过程中的作用,以便更好地阐明该蛋白的寡聚机制和毒性作用。【方法】以C-端及N-端删节的6种β-淀粉样肽段作为研究对象,通过硫磺素T荧光检测、Tris-Tricine电泳、透射电镜等方法定性定量分析这些肽段的寡聚化和纤维化能力。【结果】1)氨基酸37~42具有增强Aβ寡聚化和纤维化的功能;2)氨基酸18~36对于寡聚和纤维化很重要,但不能缺少N-端的参与;3)Aβ1-17参与β-淀粉样蛋白长纤维的形成。【结论】β-淀粉样蛋白各段氨基酸序列对该蛋白寡聚和纤维化所贡献的不同作用,这对于β-淀粉样蛋白毒性机制的研究起到一定的帮助作用。
     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

[目的]探究中草药黑老虎(Kadsuracoccinea)酵提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用.[方法]用体积分数为75％的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到酵提物;通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制...     

大型海藻龙须菜蛋白提取及双向电泳体系的优化

本文以龙须菜为材料,比较了尿素/硫脲法,改良丙酮沉淀法,Trizol法3种不同蛋白质提取方法;并从胶条长度及pH范围,上样量,分离胶浓度等因素探讨了双向电泳技术体系的优化.结果表明:采用Trizol法辅以超声破碎提取龙须菜总蛋白效果优于尿素/硫脲法和改良丙酮沉淀法;同时,采用pH 4-7,11 cm胶条,上样量为800μg,分离胶浓度为12%的双向电泳条件可获得背景清晰,分辨率好的二维电泳图谱.该体系也可以为龙须菜属和江蓠属其他海藻的蛋白质双向电泳分析提供参考.     

大黄鱼血清抗病功能蛋白分析

利用蛋白质组学技术筛选大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的抗病功能蛋白,通过对比两组抗病能力差异大的大黄鱼血清的双向电泳图谱,得到了21个显著的差异点,并用质谱获得上述差异点肽质量指纹图谱.进一步检索发现10号差异点是诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),其催化产物NO可结合病原体的特定靶点,协助大黄鱼体内的免疫系统共同抵御病原体入侵,显著提高了大黄鱼的抗病能力,所以iNOS与大黄鱼抵抗病原体入侵密切相关.     

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用．为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVA（1098—1300）-SNAT2-HA表达载体．用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Westernblot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位．pBK-CMV△（1098-1300）-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法．     

不同干燥方式对南极磷虾分离蛋白结构及功能特性的影响

采用碱溶酸沉的方法提取南极磷虾分离蛋白（krill protein isolate,KPI）,通过喷雾干燥和冷冻干燥的方式制备南极磷虾分离蛋白粉,并对这两种分离蛋白粉的结构及功能特性进行比较分析。结果表明:与冷冻干燥南极磷虾分离蛋白（freeze dried krill protein isolate,FKPI）相比,喷雾干燥南极磷虾分离蛋白（spray-dried krill protein isolate,SKPI）明度大,色泽较好;扫描电子显微镜结果显示,SKPI呈现出向内凹陷的不规则球状结构,而FKPI为薄层片状结构,SKPI的堆积密度高于FKPI;圆二色谱进一步表明,与KPI相比,SKPI和FKPI均呈现α-螺旋含量下降、β-转角含量增加的趋势,其中,SKPI的α-螺旋含量下降27.9%,β-转角含量增加12.2%,表明喷雾干燥后蛋白质的二级结构均从有规则的结构向无规则的结构转化;SKPI持水力、持油力、乳化稳定性和起泡性等均高于FKPI,而SKPI的溶解性、乳化性却比FKPI的差。可见,不同的干燥方式会改变南极磷虾分离蛋白的结构特性,并进一步影响其功能特性。     

壳聚糖/马铃薯蛋白/纳米氧化锌复合膜的研制

以马铃薯蛋白、纳米氧化锌、壳聚糖为原料制备复合膜,通过单因素试验测定马铃薯蛋白含量、纳米氧化锌含量以及超声时间对复合膜机械性能的影响,再通过Box-Behnken响应面设计试验并进行优化和验证.结果表明:马铃薯蛋白含量为0.32％、纳米氧化锌含量为0.10％以及超声时间为19.52 min的条件下,壳聚糖-马铃薯蛋白-...     

建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白 G2 的mRNA 相对表达水平的 RT-qPCR 方法

目 的 本 研 究 旨 在 建 立 一 种 实 时 荧 光 定 量 PCR 方 法, 用 于 检 测 猕 猴 三 磷 酸 腺 苷 结 合 盒 转 运 蛋 白 G2( adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2, ABCG2) mRNA 的基因转录水平。 方法 使用 NCBI 上GenBank 数据库猕猴( Macaca mulatta) 的 ABCG2 核 苷 酸 序 列 号 NM _001032919. 1 及 内 参 GAPDH 核 苷 酸 序 列 号NM_001195426. 1,借助 Primer premier 5. 0 软件设计 PCR 引物。 提取猕猴新鲜肾组 织 的 总 RNA,并 反 转 录 合 成cDNA。 接着,利用 PCR 引物进行实时荧光定量 PCR 扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析 ABCG2 的mRNA 相对表达水平。 结果 PCR 产物测序结果显示,扩增的 ABCG2 和 GAPDH 核苷酸序列与 NCBI 上猕猴的序列同源性分别为 90. 91%和 91. 14%。 ABCG2 和 GAPDH 的扩增效率均达到 80% ~ 120%,实时荧光定量 PCR 标准曲线的熔解曲线为单峰,R2 接近 1。 结论 本研究建立的检测猕猴 ABCG2 mRNA 实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。     

基于转录组测序技术揭示克罗恩病中相关的可变剪接事件

通过利用转录组测序分析了解克罗恩病(Crohn’s disease,CD)相关的可变剪接事件,鉴定高度关联的RNA结合蛋白及潜在的调控靶基因,以揭示CD形成过程中相关遗传调控机制。通过下载33个GSE66207RNA-seq数据并进行预处理,其中包括6个非狭窄非穿透型(B1型)样品、6个狭窄型(B2型)样品、8个穿透/瘘管型(B3型)样品和13个正常结肠样品;对四组样品进行差异表达基因和可变剪接事件转录组分析、进行差异表达RNA结合蛋白与差异可变剪接基因之间的相关性分析。结果显示:(1)通过差异表达基因的转录组分析发现,以正常组为参考,B1型更多基因表现为下调,B2型和B3型更多基因表现为上调。B3型的差异表达基因数量比B2型多,暗示着CD病情进展为穿透后,更多基因会出现差异表达;(2)差异可变剪接转录组分析发现,CD中存在大量剪接异常,并发生在DNA复制和细胞周期进展中。GO功能注释和富集分析显示,在B1型、B2型和B3型中,参与细胞生长的基因都发生剪接异常,在B2型和B3型中发现明显的凋亡相关通路。(3)鉴定出14个调控差异可变剪接基因的RNA结合蛋白,包括:DAZL、DDX3Y、RPS4Y1、EIF1AY、TDRD1、RBM24、RNASE2、APOBEC1、NXF3、EEF1A2、RBFOX3、PALYL、RNF17和OASL。本研究对3种表型CD进行可变剪接分析发现:在CD疾病进展中,一些参与细胞增殖、凋亡和关键信号通路的基因发生了差异可变剪接,而实验研究鉴定出的RNA结合蛋白参与了这些可变剪接基因的调控。