菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体构建及原核表达

分析菠菜叶绿体基因组全序列,选用了rbcL基因和accD基因的间隔区作为外源基因的定点整合位点,并从菠菜叶绿体基因组中克隆了rbcL基因全长和accD基因的5′端部分,长度分别为1956 bp和1320 bp。以这2个DNA片段作为同源重组片段,以烟草叶绿体基因的启动子Prrn和终止子psbA3′控制外源基因的转录,构建了包含筛选标记基因aadA基因(编码氨基糖苷-3′-腺苷酸转移酶,具有壮观霉素和链霉素抗性)和报告基因GFP(编码绿色荧光蛋白)的菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体pRAGA。酶切结果显示构建正确。将该载体转化大肠杆菌,在激光扫描共聚焦显微镜下用488 nm蓝光激发,发现大肠杆菌发出强烈的绿色荧光,而对照菌体没有荧光,表明GFP基因在原核大肠杆菌中已经成功表达。实验结果说明构建的菠菜叶绿体定点整合表达载体pRAGA可以用于菠菜叶绿体转化。     

翘嘴鳜淀粉酶基因SNPs和微卫星位点多态性的检测

本研究主要检测翘嘴鳜淀粉酶(amylase,AMY)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)和微卫星位点多态性.实验采用PCR产物直接测序法(PCR-direct sequencing,PCR-DS)检测翘嘴鳜AMY基因组序列的SNPs和微卫星位点,并使用创造限制酶切位点PCR法(created restriction sites PCR,CRS-PCR)和PCR-DS法对SNPs进行分型,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测AMY基因微卫星位点的多态性.实验结果发现AMY基因第1内含子有一个SNP位点A1,第5内含子有3个SNPs位点(A2、A3和A4);此外,第5内含子中还存在一个微卫星位点B1,共检测到4个等位基因,有9种单倍型.在翘嘴鳜群体中,4个SNP位点呈中度遗传多样性,而微卫星位点表现出高度遗传多样性.     

微卫星标记及其在微生物研究中的应用

微卫星标记技术应用于微生物学研究始于20世纪90年代,近几年来发展相当迅速.为了把握这个研究方向和促进该研究领域的发展,作者从微卫星的种类、微卫星在基因组中的分布及其功能、微卫星标记的应用前景等方面进行了概括和总结.介绍了基于杂交的SSR指纹、微卫星引动的PCR、锚定SSR、微卫星位点的PCR扩增、RAMPs标记、SAMPL标记等几种主要方法及其应用情况,并从简单重复序列在基因组中的分布及其功能、遗传标记、遗传作图、遗传多样性分析等方面总结了已有的研究成果.     

Assessment of genetic diversity in the forest musk deer （Moschus berezovskii） using microsatellite and AFLP markers

Microsatellite genotyping and amplified fragment length polymorphism (AFLP) techniques are often utilized in studies of conservation genetics of endangered animals. To select a more effective marker system for conserving the endangered forest musk deer, we used microsatellite and AFLP markers to estimate levels of genetic diversity of two populations, the pure mother Jinfengshan (JFS) group and the offspring Baisha (BS) group with introduction of new blood. It was expected that JFS would pos- sess significa...     

“叶的光合作用”教学片断及反思

教学片段： （出示一段话）每一个叶绿体，都是一个小小的绿色“加工厂”。在阳光的照射下，叶绿体可以把根吸收来的水份和气孔进来的二氧化碳，合成植物所需要的养料，同时放出氧气。叶的这种作用叫做光合作用。     

碧桃花瓣转录组微卫星特征分析

为开发碧桃转录组微卫星信息,利用454高通量测序技术,对其花瓣转录组序列进行SSR位点发掘,结果发现含SSR的序列4 705条,共得到5 668个SSR,平均每3.49 kb出现1个SSR。微卫星序列主要以三碱基重复为主,约占总数的42.66%。笔者共发现516种碱基重复基元,所占比例最高的为(AG/CT)n(18.34%),其次是(AAG/CTT)n(12.42%)。微卫星多为重复长度小于20 bp的短序列,长度大于20 bp的微卫星仅占总数的12.13%。研究还发现碧桃花瓣微卫星的频率和长度呈显著负相关(P0.05),相关系数为-0.246。     

多效唑＋缩节胺对花生生长和茎叶结构的影响

多效唑十缩节胺喷施花生后，抑制花生主茎生长，节间变粗，叶片变短变窄．茎皮层变薄，维管束宽度增加．叶柄变细，维管束长度受到抑制，宽度明显增加，机械组织显著增厚．叶片和主脉增厚，叶肉栅栏组织明显增厚，主脉维管束长度和宽度增加．叶片表皮细胞变小，气孔器长度缩短宽度增加．叶绿体基粒片层数目减少，抑制叶绿体发育．     

PP333对花生营养器官的形态和叶片超微结构的影响

本文报道了多效唑（ＰＰ３３３）喷施花生对植株性状、茎叶形态及结构的影响．结果表明：ＰＰ３３３能抑制花生主茎生长，节间缩短变粗，一级分枝数目增多，茎维管束长度变短，宽度增加，叶片变短，厚度增加，叶肉栅栏组织也增厚，叶片表面细胞变小，密度增大，气孔变小，叶绿体基粒片层数目减少，抑制叶绿体发育．     

通过叶绿体基因工程在烟草中合成中长链羟基脂肪酸聚酯

中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs, mcl-PHAs)属于微生物聚酯. PHA合酶(PHA synthase, 由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acyl carrier protein-coenzyme A transferase, 由phaG基因编码)是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶. 以aadA(氨基糖苷-3′-磷酸转移酶)基因做筛选标记, 分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体转化表达载体pTGC. 通过PDS1000/He基因枪转化法转化烟草, 获得具有壮观霉素抗性的叶绿体型转基因烟草植株, PCR和Southern Blot结果表明, 外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中且基本达到同质化. 气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8 mg/g干重, 合成的PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate, 3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate, 3-HD). 透射电子显微镜观察到转基因烟草叶片叶绿体中确有PHAs颗粒累积.     

利用微卫星标记扩充水稻双单倍体群体的遗传图谱

微卫星标记已在人类与动物的遗传作图中得到了广泛应用.微卫星标记所揭示的是简单顺序长度多态性(Simple Sequence Length Polymorphism,SSLP),可利用PCR方法检测,因而快速简便,而且所需DNA量少.微卫星标记在遗传分析中表现为共显性,具有高度的多态性,往往有多个等位形式存在,信息含量很高,目前,在植物中微卫星标记主要用于基因型分析,品系分析及基因定位,尚未大规模用于遗传作图,在水稻中,通过筛选基因组文库和检索DNA序列库,已经获得了58个微卫星标记.本研究对一个水稻双单倍体(DH)群体进行了微卫星标记遗传作图工作,将89个微卫星标记较均匀地定位在已有的遗传图谱上,为今后应用微卫星标记定位水稻基因和标记辅助育种奠定了基础