马铃薯PGBSS—GUS融合基因在块茎中专一性表达的初步研究

从ＧＢＳＳ基因克隆上，酶切得到５上游区１．２ｋｂ的序列，与ＧＵＳ报告基基因融合，构建了ＰＧＢＳＳ１．２表达载体，通过农杆菌介导的方式，将ＰＧＢＳＳ１．２转和马铃薯品种Ｄｅｓｉｒｅｅ，卡那霉素筛选获得抗性再生植和微薯，利用ＰＣＲ特异性扩增和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ的方法证明了融合基因在马铃薯基因组中的整合，Ｘ－Ｇｌｕｅ活体染色表明，微薯切片具有高ＧＵＳ酶活性，而茎段中ＧＵＳ活性相对较低，初     

浅谈英语教学中目的语非言语表达知识的导入

非言语表达是语言构成中的重要部分,它的得体运用,可以提高交际效果。鉴于外语教学中重视目的语中的言语表达忽视非言语表达的现状,本文探讨了非言语表达在外语学习中的重要意义,并提出一些实际可行的手段。     

幽门螺杆菌粘附素基因的原核表达

目的：构建幽门螺杆菌粘附素（hpaA）基因的原核表达载体，并诱导表达。方法：用PCR扩增hpaA目的基因片段，克隆至pQE-30表达载体中，构建含目的基因的表达质粒pQE-hpaA，转化E．coli DH5α，经IPTG诱导表达蛋白HpaA；Western blot分析其免疫反应性。结果：经测序hpaA基因片段由783bp组成，可编码260氨基酸残基的多肽。经SDS—PAGE分析相对分子量（Mr）约为30000。可溶性表达占全菌的42％以上。Western blot分析能与Hp全菌抗血清反应。结论：成功构建了粘附素hpaA基因的原核表达载体并能高效表达，为研制Hp疫苗提供理论依据。     

浅谈英语公共演讲课中的信心培养

针对如今公共演讲课上常以理论知识讲述为主导的教学方法,文章分析了自信因素在大学英语公共演讲课堂上的重要作用,以及教师该如何从听、说、读、写四个方面来帮助学生克服自身的心理障碍问题,让他们大胆自信的走上讲台,畅所欲言。     

我国改革受阻深层原因分析

在改革过程中,我国利益表达主体多元化导致利益表达要求的多样性,利益表达客体角色错位引起利益表达信息的失真,利益表达能力的差异性及利益表达渠道畅通的有限性,利益表达效果与成本的不成比例性等,这些就是目前我国错综复杂的利益表达局面。它对处于攻坚阶段我国的改革产生一定阻力,并在一定程度上延缓了改革的进程。     

走出英语学习的误区

东西方文化的差异，加之中国人缺乏适宜的英语学习环境，英语学习者常常会按汉语的思维模式、表达习惯、字面理解等陷入学习误区。在多年教学实践中，归类分析学习汉英语的典型范例，引导英语学习者尽快走出英语学习的误区，即：习惯用语错误理解，社会用语不当，汉语负迁移的干扰，词汇搭配混乱等，从而达到正确理解和运用英语的目的。     

苜蓿花叶病毒RNA23''''端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中，用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404，采用叶圆片法转化普通烟草，诱导再生小植株．经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．     

编码中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）一种组成型热休克蛋白70（HSC70）的cDNA克隆、测序及其表达分析

根据中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis ) EST序列信息设计引物，用RT-PCR方法，从经热休克处理的中国明对虾的肝胰腺RNA中克隆到长2090 bp的hsc70 cDNA序列，包括长1956 bp的完整编码序列（complete CDS）及部分5’端和3’端非翻译区（5’UTR 和3’UTR）。PCR及测序结果分析显示hsc70 cDNA的1～547 bp碱基所对应的基因组序列可能含有内含子，548～2090 bp碱基所对应的基因组序列不含内含子。根据编码序列推导出相应的652个氨基酸，与其他真核生物HSP70家族成员进行同源性比较，发现中国明对虾HSC70与虹鳟（Oncorhynchus mykiss） HSC71、人（Homo sapiens） HSC70、家鼠（Mus musculus ）HSP70、烟草天蛾（Manduca Sexta ）HSC70的相似性分别是85.9%、85.9%、85.8％、85.4%，表现出较高的保守性。表达分析显示，hsc70 mRNA在中国明对虾正常肝胰腺、肌肉、眼柄、血细胞、心脏、卵巢、肠和鳃等组织存在，并呈组成性表达；受到整体热休克后的对虾肌肉组织hsc70 mRNA水平(以β-actin mRNA水平为内标)与对照组没有显著的差异。     

胡萝卜根特异表达水通道蛋白基因DcRB7的分离及其启动子功能分析

从胡萝卜胚cDNA文库中分离得到一条完整的cDNA片段, 序列分析表明属于水通道家族新成员, 并与烟草根特异性表达TobRB7基因高度同源, 因此命名为DcRB7. Northern杂交分析表明DcRB7在根中特异性表达. 利用反向PCR技术, 分离获得了DcRB7基因上游约650 bp的片段. 将此片段与含有GUS报告基因表达载体进行重组构建后, 以农杆菌介导转化烟草获得相应的转基因植株. 在对转基因烟草的GUS表达特性进行了组织化学鉴定和荧光定量分析后发现, 该调控区段能指导GUS基因在烟草根中优势表达, 并表现出干旱诱导的特性.     

植物NAD-IDH基因克隆及体外表达酶活力分析

植物NAD⁺-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型“Columbia gl1”及甘蓝型油菜三系“陕2A”, “陕2B”和“垦C1”的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异.