高产紫杉醇红豆杉细胞系的紫外诱变筛选

紫外辐射能明显地增加红豆杉细胞的异质性,紫外诱变单细胞使其植板率下降为原来的1/3左右.平板克隆培养60d,挑取克隆连续转接4次,淘汰大部分后共得78个克隆系,其中克隆系C42B-09的生长速率和紫杉醇含量都较高.生长速率和紫杉醇含量分别为亲本的1.13倍和6.25倍左右,此克隆系传至第三代时已基本保持稳定.     

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选及特性分析

用经返地卫星搭载诱变处理豆科牧草紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织,以Ｌ－乙硫氨酸为筛选剂,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系ＭＥ＾ｒＢ．ＭＥ＾ｒＢ在脱离选择压９个月后,其对Ｌ－乙硫氨酸的抗性Ｉ５０（生长量半抑制时的Ｌ－乙硫氨酸浓度）比野生型高１４．２倍,表明抗性系抗笥表达稳定。抗性系还表现出对ＤＬ－甲硫氨酸的交叉抗性和对于冬氨酸     

一种简易小鼠原代肝细胞分离方法

对小鼠原代肝细胞分离方法进行改良,通过简单且经济的方法获得小鼠原代肝细胞,采用4.5号输液针经下腔静脉逆行灌流,用长条状纸板对针进行固定,以获取质量稳定的小鼠原代肝细胞悬液.结果显示,改进后的方法灌流成功率高及重现性好并可获得实验所需肝细胞,细胞对台盼蓝拒染率90%.方法操作简单,成本较低且效率较高.     

芹菜夜蛾核型多角体病毒感染5种昆虫细胞系的研究

用０．５ＭＯＩ的ＳｆａＭＮＰＶ病毒感染液感染５种昆虫细胞系：Ｂｍｅ、Ｐｘ、Ｈｖ、Ｔｎ和ＬｅＨ。结果表明：这５种细胞系对ＳｆａＭＮＰＶ都敏感，感染１４４ｈ后，受染细胞百分率分别是２．８４％、１１．８３％、８％１、６．６５、６．２２和７．０２。电镜观察可见感染细胞核中出现病毒发生基质、病毒粒子和多角体，病毒形态大小分别是：多角体１．４５±０．１０μｍ，病毒粒子３８．１±２．０９×３０６±１４．５ｎｍ，     

干细胞技术进展

干细胞技术是人类后基因组计划的一部分。随着这一技术的科研和应用的快速发展,人们开始认识到这一技术的具大诱惑。本文对干细胞的概念、种类、技术原理、进行了概括,对干细胞技术应用领域、发展前景等进行了研究。     

移植前AS-30D肝癌细胞状态决定其移植后在大白鼠体内的生长周期

在SpragueDawley(SD)大鼠身上测定AS 30D肝癌细胞系转移前的状态。不同来源的细胞 :a)体内 ,来自其他移植的大白鼠 ,b)体外 ,来自培养的细胞 ,和c)冷冻贮存 ,来自液氮储存罐 ,被分别移植入 5周的雌性SD大鼠体内 (数目分别为 5、3、5 )。每只鼠腹腔注射 0 5mL细胞混悬液 ,包含 1 5× 10 6个细胞。结果显示 ,从细胞移植的液体体积 ,细胞浓度 ,总细胞数 ,细胞生存能力和每日食物以及水的消费量等质量参数来看 ,每组白鼠之间没有明显不同。但是 ,如果用其他的细胞代替体内细胞移植到大白鼠的腹腔 ,细胞潜伏期将延长一半或 5d。所以 ,移植前…     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

川芎嗪对缺氧缺糖损伤大脑皮层神经元的保护作用及初步机制研究

目的:研究川芎嗪(TMP)对缺氧缺糖(OGD)损伤大脑皮层神经元的保护作用,探讨TMP神经保护作用的可能机制.方法:建立体外原代大脑皮层神经元OGD模型,利用MTT法和LDH试剂盒分别检测细胞存活率及细胞毒性;Hoechst染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞内ROS的含量;实时-PCR检测细胞内线粒体生物合成相关mRAN(PGC-1α,TFAM)的表达量.结果:经OGD损伤4 h后,细胞活力明显下降,细胞释放的LDH含量升高;细胞凋亡形态学特征明显,细胞凋亡率增加;细胞内ROS含量增加,同时PGC-1α和TFAM mRNA的表达量明显减少.TMP预保护后,可以明显提高OGD损伤后细胞的存活率,降低LDH的释放,改善细胞核形态变化,并且减少细胞凋亡率,抑制细胞内ROS的产生,提高PGC-1α和TFAM的表达.结论:TMP对OGD损伤的神经元具有神经保护作用,其机制可能与抗氧化,抗凋亡和增加线粒体生物合成相关因子(PGC-1α,TFAM)的表达有关.     

激素对大豆悬浮细胞系愈伤组织诱导的影响

以大豆无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,通过比较筛选2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-苄基腺嘌呤(6-BA)的浓度及培养条件.诱导出相应的愈伤组织,并成功建立大豆悬浮细胞培养体系.结果表明:单独使用2,4-D即可诱导出适于建立大豆悬浮细胞系的愈伤组织;加入6-BA导致子叶和下胚轴外植体剧烈膨大,出愈率低,形成的愈伤组织量明显减少且局部组织坚硬,难以建立悬浮细胞系.组织切片观察结果显示加入6-BA致使外植体和愈伤组织之间的部分组织细胞核消失、细胞壁显著增厚,是悬浮细胞体系难以建立的主要原因.     

5-氟尿嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的研究

为进一步了解抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）的作用机制,研究了5-Fu对体外培养的人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人宫颈癌细胞系（Hela）这两种肿瘤细胞生长繁殖的影响及有效的诱导肿瘤细胞凋亡的浓度和作用时间。使用Leukostat染色法测定了细胞凋亡的百分率;DNA电泳分析了细胞凋亡出现的特异的DNAladder现象。结果表明,用10～20mmol／L浓度范围的5-Fu作用24h,能够引起肿瘤细胞产生典型的凋亡现象。