马流感病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

为研制马流感快速分型特异性诊断试剂,我们以马流感纯化病毒（EIV）的两个型病毒分别免疫BALA／c小鼠,采用细胞杂交瘤技术筛选克隆出分别针对两型EIV的单克隆抗体细胞株4株,其中经检测分别命名为3C2-B2-F10甲1单抗细胞株、5G10-G12-A10甲2单抗细胞株,抗体亚类检测试剂盒鉴定3C2-B2-F10为IgM、轻链为K链抗体,5G10-G12-A10IgG2a、K链抗体,均具有稳定分泌高效价单抗能力,针对EIVA／equine／布拉格／56H7N7的间接ELISA抗体效价达到291：512（上清液）与2^181：262144（腹水）;针对EIVA／equine／miami／63H3N8的间接ELISA抗体效价达到2^101：1024（上清液）与2^201：1048576（腹水）。特异性高,以Western Blot分析A／equine／布拉格／56H7N7马流感病毒（EIV）、A／equine／miami／63H3N8马流感病毒（EIV）、马动脉炎病毒（EAV）、马传染性贫血病毒（EIAV）、马乙型脑炎病毒（JEV）为抗原,病毒样品不发生交叉反应,其金标夹心检测病毒效果良好。     

冷冻干燥技术及冻干抗体药物的研究进展

近年来,恶性肿瘤等疾病的发病率不断上升,造成极大的社会和经济负担.抗体药物,特别是单克隆抗体药物有效克服了传统药物的缺点,具有靶向性好、毒副作用低、疗效显著等特点,在这些疾病的治疗中得到了广泛的应用.由于抗体药物在液体制剂中不够稳定,极大的限制了抗体药物应用,冷冻干燥技术有效解决了这一问题,显著提高了抗体药物的稳定性,已成为抗体药物制剂的研究热点.该论文综述了冷冻干燥技术的研究进展并介绍了已上市的冻干抗体药物,为提高抗体制剂的稳定性以及抗体药物冻干制剂的研发提供参考依据.     

幽门螺杆菌鞭毛蛋白A单克隆抗体的制备与鉴定

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)鞭毛蛋白A(FlaA)可作为临床诊断标志物,但目前尚无识别FlaA蛋白的特异性抗体.该研究构建了HpflaA基因表达质粒,表达并纯化了HpFlaA重组蛋白,并以此重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备HpFlaA单克隆抗体,最后对抗体的亚型、效价、...     

应用单克隆抗体建立快速狂犬病毒抗原检测方法及其应用的研究

该项目运用单克隆抗体技术快速检测狂犬病毒抗原，采用狂犬疫苗作为标准抗原，免疫动物，制备出抗狂犬病毒的单克隆抗体，再将获得的多株单抗混合，增加单抗的亲合力，捕捉狂犬病毒抗原，做成酶免疫双抗体夹心法试剂。用该试剂对不同来源的狂犬病毒株和不同来源的狂犬疫苗进行检测，结果与法国巴斯德研究所生产的试剂测试结果相同，     

肌钙蛋白C-肌钙蛋白Ⅰ亲和层析动力学的模型

肌钙蛋白（Ｔｎ）Ｉ有着极强的心肌特异性,心肌肌钙蛋白是唯一存在于心肌细胞中的异构体,可以通过检测患者血液中的心肌ＴｎＩ含量来确诊急性心肌梗塞。根据在钙离子存在下,ＴｎＣ和ＴｎＩ特异结合的特性,可以利用亲和层析提取纯化ＴｎＩ。根据ＴｎＩ从亲和层析柱的穿透曲线,对Ａｒｎｏｌｄ等人提出的孔内扩散模型进行了分析,证明孔内扩散过程不是此亲和层析过程中的限速步骤。在缓冲液体系（ｐＨ８．０）中,提出了包括以一个正向二级、逆向一级来描述ＴｎＣ—ＴｎＩ反应速率方程,并用实验验证了该模型的正确性,从而首次阐明了ＴｎＣ—ＴｎＩ提取纯化体系的动力学机制,揭示了该过程的限速步骤为ＴｎＣ—ＴｎＩ反应过程。     

KGF-2单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立

目的建立KGF-2单克隆抗体间接ELISA的筛选方法 ,制备KGF-2单克隆抗体.方法以KGF-2为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.通过棋盘滴定方法确定间接ELISA的抗原包被浓度及一抗、二抗最佳工作浓度;利用建立特异性好的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞株.结果通过棋盘滴定最终确定了500μg/L的抗原包被浓度、1∶1 000的一抗血清稀释倍数及1∶2 000的二抗血清稀释倍数;筛选到两株可稳定分泌抗体、效价较高的杂交瘤细胞株.结论该研究建立了灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于KGF-2单克隆抗体的制备及检测.     

雌三醇单克隆抗体的制备与表征

活化雌三醇(E3)C3处的酚-OH,与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备得E3的完全抗原.利用完全抗原免疫动物,采用单克隆抗体技术,经过细胞融合、克隆筛选、扩大培养、动物体内诱生等过程,最后获得了E3的单克隆抗体.对纯化的单克隆抗体的性质进行表征,结果表明:抗体的效价为6.0×10-10mol/L,抗体属于IgG1型,分子量为168000u ,单克隆抗体与固定化抗原亲和常数为4.7×107L/mol.     

用ELISA双抗体夹心法检测人重组白细胞介素2(rHuIL-2)在酵母菌中表达的研究

采用ELISA夹心法检测人重组IL-2在酵母菌中表达产物的免疫学活性.结果表明,本法具有特异性强、简易、快速和重复性好等特点,尤其对利用工程菌制备及纯化rlL-2过程中能较快地监测出是否有该产物表达.     

HMG＿（14）单克隆抗体杂交瘤株的建立

以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ（ＨＭＧ＿１，ＨＭＧ＿（２ａ），ＨＭＧ＿（２ｂ），ＨＭＧ＿（１４），ＨＭＧ＿（１７））免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及冻存复苏，获得了三株稳定分泌抗ＨＭＧ＿（１４）的杂交瘤细胞株（１Ｃ＿（１２），１Ｏ＿３和２Ｆ＿２），经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定，与其它几种ＨＭＧ无反应，抗体为ＩｇＧ＿１亚型。腹水ＨＭＧ＿（１４）单克隆抗体经ＳｅｐｈａｄａｘＣＬ－４Ｂ亲和柱得到了纯化。     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.