嗜热蛋白酶生产菌的筛选

从温泉水、高温堆肥等样品中初筛到62株嗜热蛋白酶生产菌,进一步复筛出一株高产嗜热蛋白酶的生产菌株DPE7(菌株来自温泉水),该菌株被初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp．)．嗜热蛋白酶生产的最适碳源是葡萄糖, 最佳氮源为酵母粉加硫酸铵,Ca2 对菌株产酶具有促进作用．在65℃、175 r／min、pH 9的产酶培养基中振荡培养 24 h后,发酵液中的酶产量高达23．4 U／mL(60℃测定)．     

弹性蛋白酶保护因子--Elafin结构基因腺病毒载体穿梭质粒的构建、鉴定及表达

构建能表达弹性蛋白酶保护因子———elafin基因腺病毒表达载体的穿梭质粒,为进一步包装能高效表达结构蛋白的腺病毒载体做准备.以含有elafin基因的真核质粒pEGFP-N1-Elafin为模板,PCR扩增elafin基因,PCR产物以SalⅠ、EcoRⅤ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中CMV启动子下游SalⅠ与EcoRⅤ位点之间,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-Elafin,通过SalⅠ及EcoRⅤ双酶切、PCR及插入片段序列测定对该质粒进行鉴定,将pAdTrack-CMV-Elafin转染293细胞,以RT-PCR及Western-Blot检测其在293细胞中的瞬时表达.结果表明:双酶切、PCR及测序鉴定证实,pAdTrack-CMV-Elafin穿梭质粒的插入片段为elafin基因,用pAdTrack-CMV-Elafin穿梭质粒转染293细胞后可见绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和Western-blotting表明其可在293细胞中瞬时表达.     

腈基类化合物对半胱氨酸蛋白酶的抑制机理

半胱氨酸蛋白酶是人体自身产生的重要酶类物质,它广泛的参与人体新陈代谢和蛋白的水解。但过量产生的半胱氨酸蛋白酶会导致骨质疏松和乳腺癌。腈基类化合物分子是一种新发现的具有抑制半胱氨酸蛋白酶作用的靶向药物分子,高效且低副作用。但是它的抑制机理一直没有得到解决。本文介绍借助量子力学/分子力学（Q M/M M）的计算研究,解得了此类化合物对于半胱氨酸蛋白酶的抑制机理,并借助分子学软件设计了一种新型药物分子,有助进一步药物研究。     

半胱氨酸化学键合金纳米颗粒用于氧化性小分子可视化测定的载体研究

金纳米颗粒(AuNPs)具有独特的等离子体共振吸收性质. 半胱氨酸与金纳米颗粒之间的 Au–S 共价键作用导致金纳米颗粒等离子体共振吸收红移, 本文据此建立了一种通用性的氧化性小分子的可视化分析方法. 当氧化性小分子如H₂O₂ 或者单线态氧(¹O₂)存在时, 半胱氨酸的巯基被氧化成–S–S–键, 使半胱氨酸诱导金纳米颗粒聚集的能力降低, 从而金纳米颗粒的等离子体共振吸收峰由740 nm 蓝移到531 nm, 溶液颜色逐渐由蓝变红, 据此实现了氧化性小分子的可视化检测. 研究发现, 740 和531 nm 处的吸收度比值(A₇₄₀/A₅₃₁)与H₂O₂ 或者¹O₂ 的浓度呈现良好的线性关系. 将所建立的方法用于老鼠脑浆中H₂O₂ 的检测, 检测结果与流动注射-化学发 光法一致.     

淘汰蛋鸭肉质蛋白酶嫩化研究

对木瓜蛋白酶和风味蛋白酶嫩化淘汰蛋鸭肉的效果进行了探讨,比较了酶解条件下鸭胸肉的肌原纤维小片化指数和剪切力的变化,并分析了肌原纤维小片化指数与剪切力的相关性.结果表明:木瓜蛋白酶对鸭肉的酶解作用更强烈,达到相同的嫩化效果(即相同的肌原纤维小片化指数或剪切力值)所需的酶用量大约为风味蛋白酶的一半.嫩化后鸭肉的肌原纤维小片化指数和剪切力之间存在着显著的相关性,木瓜蛋白酶和风味蛋白酶的这种相关性分别为-0.965和-0.950.     

若干种活蝎胸腺蛋白酶的群子统计参数与生物功效关系的研究

分析了若干不同产地蛋白酶中的生命动力源相关元素,并根据第四统计力学群子统计参数理论,证明了其无毒性,且有极高的药用价值。结果表明,太行山脉系的活蝎蛋白酶的阴阳性属为（-）（+）（+）（+）中药类;故具有很高的抗毒及杀菌功能,有强烈的清热解毒功效,兼有很好的免疫功能,临床试验表明确实具有良好的抗癌、抗糖尿病、抗艾滋病及抗中风的功能。     

小鼠肥大细胞蛋白酶4的原核表达和多克隆抗体制备

文章构建小鼠肥大细胞蛋白酶4（mMCP-4）原核表达体系,获得原核表达蛋白,并制备兔抗mMCP-4多克隆抗体,提取小鼠脾细胞总 RNA ,运用 RT-PCR技术获得目的基因 mMCP-4,构建重组原核表达载体pET28a-mMCP-4,将其转化到大肠杆菌BL21中诱导表达。mMCP-4融合蛋白经Ni亲和层析法纯化后,作为抗原免疫兔子获得mMCP-4多克隆抗体。采用ELISA法测抗体效价,western blot检测抗体特异性。结果表明,构建重组表达质粒pET28a-mMCP-4,经大规模原核表达获得大量mMCP-4融合蛋白,制备的兔抗血清效价达1∶128000,并表现出较好特异性。研究结果为进一步研究mMCP-4生物学功能奠定了基础。     

豆制品废渣发酵液对青菜种子萌发及植株生长的影响研究

枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤与根际的产酶细菌,在生物肥料领域具有广阔的应用前景．以豆制品废渣为唯一有机氮源进行液体发酵,测定了3株具有高活力的产蛋白酶枯草芽孢杆菌（BY25,NTI,NT2）的发酵液中氨基酸组成与浓度、蛋白质浓度、蛋白酶活力的差异．通过种子发芽和青菜盆栽实验,研究了发酵液对青菜种子萌发及植株生长的影响．发现实验组中BY25豆制品废渣发酵液能够显著促进青菜种子发芽与幼苗根系生长,培养96h后种子发芽率较添加去离子水处理的空白对照提高了13％,青菜幼苗平均根系长度较空白对照增加了66．3％;而以大豆粉为唯一有机氮源的BY25大豆粉发酵液对照组对青菜发芽和长根则产生显著抑制作用,同时BY25发酵液热灭活对照也无法表现出任何促进生长作用,说明发酵液中的蛋白酶等活性成分可能是影响种子萌发和幼苗生长的主要因子．添加BY25豆制品废渣发酵液培养40d后,盆栽青菜叶片SOD酶活力及根系活力均显著提高．     

若干蛇毒蛋白的结构生物学研究

以本研究组较有研究特色的五种蛇毒蛋白家族为线索,简要综述了蛇毒金属蛋白酶、蛇毒丝氨酸蛋白酶、蛇毒crisp蛋白、蛇毒磷脂酶A2及蛇毒神经毒素等蛋白家族有关结构生物学研究的结果、现状及进展.强调了蛇毒蛋白研究中蛇毒糖蛋白的结构生物学研究、超高分辨率晶体学研究及与蛇毒蛋白相关的复合物结构生物学研究的重要性.     

Autophagy Plays a Potential Role in the Process of Sea Cucumber Body Wall ＂Melting＂ Induced by UV Irradiation

The changes of tissue appearances and structures in the process of UV-induced ＂melting＂ for sea cucumber （Stichopus japonicus） body wall were studied. And the localization and determination of acid phosphatase （ACP）, Cathepsin B and Cathepsin L activities were also investigated. The results show that the connective tissue was damaged with many hollows emerging and the regular collagen bundles were broken apart into irregular fragments. Margination of condensed chromatin at the nuclear membrane was observed. Both Golgi＇s body and endoplasmic reticulure swelled, curled, and eventually double- or multi-lamellar vesicles were formed. A number of autophagic vesicles distributed in all through the whole cytoplasm. ACP becomes more active after UV irradiation. The activities of cathepsin B and cathepsin L increased in UV-treated sea cucumbers and both achieved their maximum under certain conditions, It indicates that autophagy plays a potential role in the ＂melting＂ process for sea cucumber body wall induced by UV irradiation.