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克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NSl基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础. 相似文献
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从武夷山的一枯枝上分离得到了一株稀有软骨霉状菌,在培养过程中发现,该株黏细菌在人工培养基上只有在与一种未知的细菌共培养的状态下才能长出典型的子实体并保持菌种的活力.然而要从共培养的菌落中纯化这株黏细菌,使用常规的黏细菌纯化技术几乎是不可能.在这种情况下对伴生细菌进行16SrDNA菌种鉴定,再根据鉴定为施氏假单胞菌(Ps... 相似文献
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通过(NH4)2SO4分级沉淀、HiPrep 26/10 Desalting脱盐柱、Source15Q阴离子交换柱、Source 15 S阳离子交换柱、HiTrap 16/60 Sephacryl S 200 HR凝胶过滤等技术,分离纯化3种来源里氏木霉、黑曲霉、里氏木霉与黑曲霉混合纤维素酶液中的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经SDS PAGE电泳鉴定均为电泳纯,测得黑氏木霉、黑曲霉单独培养β-葡萄糖苷酶相对分子质量分别为68、129 ku,而混合菌培养分离得到两种β-葡萄糖苷酶分子质量大小分别为66.2、134 ku。与单独培养的β-葡萄糖苷酶相似。3种来源的β-葡萄糖苷酶经多步分离纯化后的纯化倍数分别为37.25、40.21、30.12,酶活回收率分别为20.1 2%、23.21 %、28.56 %。 相似文献
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目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)... 相似文献
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以总黄酮含量和转移率为评价指标,采用多种方法提取纯化华中枸骨叶总黄酮(ICTF),并以TNF-α诱导人关节滑膜成纤维细胞MH7A为滑膜炎症细胞模型评价其抗RA滑膜炎症活性,试剂盒测定炎症介质NO含量,RT-qPCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8mRNA的转录水平.结果表明,华中枸骨叶乙醇总提取物经石油醚脱脂... 相似文献
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针对鞘层结构,建立了鞘层模型和离子速度分布函数,导出了离子平均动能的积分表达式并得出数值积分的结果.用级数的两项拟合平均动能积分表达式的对数项,积分得到解析结果和简化结果.应用积分表达式、解析式及简化式进行计算,得出了圆柱形鞘层内不同位置(半径)处的粒子平均动能.结果表明鞘层越厚、粒子平均自由路程越小,则它们的差别越小.它们可有效地应用于散布在反应室各处粉体的刻蚀和纯化. 相似文献
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应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对翠蓝眼蛱蝶夏型和秋型(♀♂)成虫头部、腹部和胸部的可溶性蛋白质进行测定.结果表明,成虫胸部的电泳蛋白条带最丰富(7~11条),胸部有分子量为96300、72623、38583等3条共有带,腹部有96300、62153、45968等3条共有带,头部有11658一条共有带.翠蓝眼蛱蝶夏型和秋型(♀♂)成虫胸部电泳蛋白的条数亦有差异,夏型♂有8条,夏型♀有10条,秋型♂有7条,秋型♀有11条,它们在38583~96300之间的蛋白条带数目和位置相近,在13889~29381之间有所差别,夏型和秋型有96300、72623、38583等3条共有带,夏型有112523、51162等2条特征带,秋型在83222处有1条特征带.比较翠蓝眼蛱蝶夏型和秋型(♀♂)成虫胸部蛋白质组成相似性可知夏型♀与秋型♀的差异性较小(相似系数为0.615),而夏型♂和秋型♂(相似系数为0.250)的差异性较大.♀♂之间差异比夏型、秋型间差异大.由数码凝胶成像与分析系统进行凝胶图谱聚类分析,翠蓝眼蛱蝶按取样的不同部位聚合成头部、腹部和胸部3类. 相似文献
90.
羊栖菜多糖分离纯化和结构的初步鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
将提取的羊栖菜多糖用sevage法除蛋白、H2O2脱色后得到羊栖菜多糖半纯品,依次通过DE-AE-52、Sephadex G-200柱层析分离纯化后得到SFPS-B2、SFPS-C1、SFPS-D2三个多糖组分,用Sephacryl S200-HR柱层析鉴定纯度,三种组分的多糖为均一多糖,质量分数分别为86.02%、81.05%、86.95%.对SFPS-D2进行结构初步研究,通过紫外光谱、红外光谱和毛细管电泳分析,结果表明SFPS-D2不含蛋白质和核酸,多糖组成以β构型的吡喃糖苷键为主,含有硫酸基-O-SO3,其单糖组成以木糖、葡萄糖和半乳糖为主,其比例为木糖∶葡萄糖∶半乳糖=3.45∶5.8∶1. 相似文献