凝血酶原活性检测对各型肝病疗效和预后估计的意义

目的 检测各型肝病患者的凝血酶原活性，评价肝病的疗效和预后。方法 巨齿蛇毒发色底物法检测各型肝病病人215例。结果 各型肝病病人的凝血酶原活性都可出现不同程度的下降，并且下降的程度与病情的严重程度成正相关性。结论 检测凝血酶原活性能准确地了解病人的肝功能，对判断各型肝病的疗效和预后的估计有重要意义。     

Ⅸ因子重组质粒的构建及其转化细胞移植在小鼠体内的表达

血友病B是由于凝血因子Ⅸ缺乏所致的一种严重出血性遗传病,其临床治疗主要依靠输血或补充人Ⅸ因子浓缩制剂,但这种替代疗法不仅疗效短,费用昂贵,而且使患者面临着爱滋病毒及肝炎病毒感染的威胁。目前,利用基因转移技术进行遗传病基因治疗的研究已取得令人注目的进展。在先前的血友病B基因治疗的研究中,我们构建了几个带有不同启动子控制     

乳汁中分泌有活性的人凝血因子Ⅸ的转基因羊的研制

在人类内源性凝血系统中,活化的因子Ⅸ和因子Ⅷ、磷脂、钙离子相互作用,形成一种复合物,使凝血因子Ⅹ转变成活化的因子Ⅹ,促进凝血酶生成,从而在凝血过程中起重要作用.人凝血因子Ⅸ(ｈｕｍａｎｆａｃｔｏｒⅨ,ｈＦⅨ)缺乏导致一种Ｘ＿伴性遗传的出血性疾病血友病Ｂ,发病率为1/100000[1].血友病Ｂ的治疗目前主要靠替代疗法,即注射正常人血浆制剂以补充患者所缺乏的ＦⅨ.然而,这种疗法存在着血液来源困难以及从供血者传染肝炎病毒、爱滋病病毒等致病因子的危险,故生产“无毒”的ｈＦⅨ制剂长期以来是人们的迫切愿望.虽然通过重组ＤＮＡ技术已…     

Expression of human clotting factor Ⅸ mediated by recom- binant lentiviral vector in cultured cells and hemophilia B mice

To explore the expression of human clotting factor Ⅸ (hFⅨ) cDNA in vitro and the feasibility of gene therapy for hemophilia B mice mediated by recombinant lentiviral vector, a recombinant hFⅨ lentiviral vector driven by ubiquitin-C promoter, FUXW, and by ABP liver specific promoter, FAXW, was constructed respectively. Recombinant lentivirus was harvested from 293T cells by calcium phosphate-mediated transient cotransfection of three plasmids (transgene vector, CMV腞8.2, VSV-G). hFⅨ expression was detected in supernatant of 293T, BHK and L-02 cells infected with FUXW virus, whereas higher expression of hFⅨ levels (630 ng/106 cells/48 h) was detected only in L-02 cells infected with FAXW virus. Serum hFⅨ antigen was detected in all hemophilia B mice treated with FAXW virus by tail vein injection, an efficiency level of hFⅨ was observed (45 ng/mL, approximately 1% of normal human levels), the expression lasted for more than 60 d. The results indicated that HIV-based lentiviral vectors offer a promising approach to the gene therapy of hemophilia B.     

人凝血因子X单克隆抗体的研制及鉴定

目的　用于提取高纯度凝血因子X(FX)和制备缺乏FX血浆 ,以及建立FX抗原的ELISA检测方法等 .方法　用较高纯度的FX免疫Balb/C小鼠 ,经过 2次基础免疫 ,1次加强免疫 ,3d后取其脾细胞与骨髓瘤SP2 /0 Ag14细胞在PEG作用下进行细胞融合 ,经间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株 ,通过免疫印迹试验、交叉反应试验、相加试验和二价金属离子依赖性试验等 ,对单克隆抗体进行鉴定 .结果　经 3～ 4次克隆化后获得了 10株能稳定分泌FX单克隆抗体 (FXMcAb)的杂交瘤细胞株 ,Ig亚类均为IgG1型 ,小鼠腹水效价均在 10 6以上 ,FXMcAb只与FX抗原起特异性反应 ,FXMcAb与FX抗原的结合不同程度地依赖于二价金属离子Zn2 .结论　所筛选出的FXMcAb为高纯度FX的提取和缺乏FX血浆的制备以及FX抗原的ELISA检测方法的建立 ,提供了试剂准备 .     

双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白

用双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白。在转入了外源人凝血因子IX基因的CHO细胞和HSF细胞的培养液中均测得一定量的IX因子蛋白,其量相当于正常人血浆IX因子蛋白的0.89%～3.81%,而对照细胞均为阴性结果。对一例血友病B患者(IX:C<0.1%)的分析结果表明,其血浆中含有的IX因子蛋白量相当于正常人的52.3%,因而将此病例归属于血友病B~R型。本法灵敏度高、特异性强、重复性好,可与一期法相互补充,应用于临床血友病B的诊断、分类、家系分析及携带者的检出。     

人凝血因子ⅨcDNA离体表达调控的研究

构建了带有人ｈＦⅨ ｃＤＮＡ及不同调控顺序的重组质粒和反转录病毒载体，系统比较了不同启动子，增强子在不同靶细胞中对ｈＦⅨ ｃＤＮＡ表达的作用，ＭｏＭＬＶ病毒的ＬＴＲ启动子在小鼠成纤维细胞中控制转录能力较强，还研究了ｈＦⅨ基因自身内含子Ⅰ及ＩＬ－２基因内含子对ｈＦⅨ ｃＤＮＡ的表达增强艇，并就双启子和选择基因对ｈＦⅨ ｃＤＮＡ表达的影响进行了实验探讨。