浅析内质网与细胞凋亡

内质网(endoplasmic reticulum,ER)在细胞内分布广泛,是最大的细胞器,主要负责蛋白质的合成转运、信号肽识别、糖基化修饰等过程和钙离子的贮存,信号转导及细胞内钙的再分布。细胞凋亡是诱导性细胞自杀过程,主要由线粒体介导。近来研究发现过度内质网应激可启动细胞凋亡,是一条新的细胞凋亡信号传导通路,这一信号传导通路包括非折叠蛋白反应和钙离子起始信号等机制,并且,由内质网应激特异性激活Caspase-12而最终导致细胞凋亡。本文对该凋亡途径的研究进展作了简要综述。     

氧化型低密度脂蛋白诱导3T3-L1脂肪细胞内质网应激相关标志物p-eIF2a、CHOP表达

目的 观察氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导3T3-L1脂肪细胞内质网应激相关标志物p-eIF2a、CHOP的表达,探讨ox-LDL对3T3-L1脂肪细胞内质网应激的诱导作用.方法 体外培养3T3-L1脂肪细胞,用ox-LDL分别干预脂肪细胞6小时、12小时、24小时,用RT-PCR检测CHOP mRNA表达,用Western blot检测p-eIF2a、CHOP蛋白表达.结果 ox-LDL可诱导脂肪细胞p-eIF2a、CHOP表达,p-eIF2a表达发生在ox-LDL作用早期(6小时,12小时),24小时表达有所下降,而CHOP的表达强度随时间增加,24小时表达达到高峰.结论 ox-LDL可诱导3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激,激活未折叠蛋白反应信号通路.p-eIF2a表达发生在ox-LDL作用早期,而CHOP的表达强度呈时间依赖性.     

拟南芥液泡膜水孔蛋白的互作蛋白AtSM34 参与种子萌发的渗透胁迫响应

水孔蛋白(aquaporin, AQP)广泛参与植物的各种生理活动, 但还有许多调控机制未被发现. 为进一步对其调控因子进行研究, 运用酵母双杂交筛选拟南芥液泡膜水孔蛋白TIP1;1(tonoplast intrinsic protein, TIP)的互作子, 这是拟南芥中第一个被发现的液泡膜上具有高度水转运活性的蛋白. 以AtTIP1;1 为诱饵, 筛选得到一个新的TIPs 结合蛋白, 并在酵母和植物细胞中验证了这种结合. 该蛋白被命名为AtSM34, 编码一个含309 个氨基酸的多肽, 预测分子量为34 kD, 具有1 个单独的MYB/SANT 样结构域. AtSM34 启动子融合GUS 组织化学染色分析显示, 其表达主要位于花、茎和叶中, 尤其是维管束组织, 并且响应渗透胁迫. AtSM34 定位于内质网, 截断分析显示其N 端(1~83 位氨基酸)对于其定位至关重要. 过表达AtSM34 导致转基因植物对外源甘露醇、山梨醇及脱落酸更加敏感, 表现为萌发延迟. 进一步研究发现,AtSM34 也可与AtTIP1;2 和AtTIP2;1 结合, 这2 个TIP 蛋白对液泡渗透调节发挥着重要作用,并在种子萌发阶段大量表达. 这暗示着AtSM34 可能通过影响水孔蛋白基因的表达, 参与种子萌发早期阶段的渗透胁迫响应.     

浅谈癌细胞结构的变化

本文从质膜、内质网、高尔基体、溶酶体、细胞核、骨架系统等八个方面对癌细胞的结构特征进行了总结     

青岛文昌鱼Sec61γ基因的克隆与同源性分析

对青岛文昌鱼神经胚cDNA进行测序，获得了4个Sec61γ的EST，经拼接得到编码文昌鱼Sec61γ基因全长cDNA序列并据此得到Sec61γ的氨基酸序列。通过对Sec61γ蛋白的结构分析及其与多种脊椎动物同种蛋白的同源性进行比较，发现Sec61γ与人、鼠、犬及果蝇的Sec61γ，具有较高的同源性，从一个侧面证明文昌鱼在进化上是位于无脊维和脊椎动物之间；同时说明Sec61γ基因在进化上具有较高保守性。     

小麦内质网氧化还原酶在毕赤酵母中的表达

为开发健康天然的新型酶制剂型面粉改良剂,利用毕赤酵母重组表达了小麦内质网氧化还原酶1(wEro1);将wero1基因亚克隆至毕赤酵母表达载体pPICZα A,实现了wEro1在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的分泌表达,优化诱导表达条件后wEro1的产量可达(53.24±2.11) U/mL;应用硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化了wEro1,对电泳纯wEro1进行酶学性质研究.结果表明:wEro1具有催化二硫键异构酶(PDI)的巯基氧化活性,且最适pH为7.5,最适温度为30℃;在低温和中性pH条件下,该酶具有较好的稳定性.将毕赤酵母重组wEro1添加到面粉中,考察其对面粉加工品质的影响,发现毕赤酵母重组wEro1改善面粉粉质特性的能力比大肠杆菌重组wEro1更强.     

FBXO6稳定表达肿瘤细胞系的构建及其亚细胞器定位

检测FBXO6在多种肿瘤细胞中的表达和定位情况并构建稳定表达FBXO6的肿瘤细胞株。运用RT-PCR方法,在人胚肾293T细胞以及9种不同来源的肿瘤细胞中,检测了FBXO6的表达情况。以载体质粒pBabe-3Flag-FBXO6-puro/pBabe-3Flag-con、包装质粒pCMV-GAG-POL及包膜质粒pCMV-VSVG用Lipofectamine2000共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定FBXO6的表达。利用激光共聚焦荧光显微镜,采用间接免疫荧光方法,检测外源性FBXO6在A549中的亚细胞定位。在10种不同来源的细胞株中,FBXO6在A549细胞中的表达最高。成功筛选出嘌呤霉素抗性细胞系A549-Con与A549-3Flag-FBXO6。Western blot方法发现A549-3Flag-FBXO6细胞系稳定表达FBXO6蛋白。间接免疫荧光发现FBXO6与内质网tracker有共定位。FBXO6在肺癌A549细胞中高度表达,构建了稳定表达FBXO6的A549细胞系,部分FBXO6分布在内质网中。     

内质网膜蛋白STIM1内质网内片段的重组表达与纯化结晶

将位于内质网内的STIMI的N端片段,包括EF手性区域和SAM结构域,分别标记上N端和C端6＊His标签,在大肠杆菌中重组表达,经过亲和层析和凝胶过滤层析的纯化,得到了大量、纯净的重组STIMIN端蛋白,通过悬滴气相扩散法得到了一些三维梭状晶体．     

利用志贺毒素B亚基融合蛋白研究其胞内降解作用

志贺毒素B亚基（StxB）能与哺乳动物细胞表面受体糖脂Gb3特异结合内吞进入细胞，经早期胞内体／循环胞内体到达高尔基体后，再逆向运输至内质网。目前研究尚不明确StxB在胞内运输时是否发生降解。本文利用基因工程原理在StxB的C端添加Myc标签，获得融合蛋白StxB—Myc，应用免疫荧光方法，研究StxB的C端是否发生水解。实验结果表明，融合蛋白StxB—Myc在从细胞膜经胞内体到达高尔基体的过程中不发生水解；进入高尔基体后，B亚基C端发生降解，降解后的小片段能逐渐进入溶酶体中发生水解，而此过程不影响降解后的B亚基到内质网的逆向运输。     

内质网应激反应与衰老相关疾病

内质网是真核细胞合成膜蛋白和分泌蛋白的主要场所,当细胞经历缺氧、钙离子稳态失衡、糖基化异常或内质网内蛋白合成急剧增加时,就会造成腔内未折叠蛋白聚集体的形成,引发细胞毒性.这时便会激活一系列信号通路,通过增加内质网中分子伴侣的数量、降低蛋白合成速率、加快未折叠蛋白降解来保护细胞,当刺激严重或时间过长则会引起细胞凋亡.这种反应就称为内质网应激反应,也叫未折叠蛋白反应.正常人体细胞随着分裂次数增加或受外界因素诱导逐渐进入一种不可逆的细胞周期阻滞,即细胞衰老.细胞衰老会伴随着各种生理生化的变化,如内质网的结果和功能的改变.内质网应激反应会随着细胞衰老而发生一些改变,与衰老相关疾病密切相关而备受关注.因此深入研究内质网应激反应对于揭示衰老及衰老相关疾病的分子机制具有重要的科学意义.