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961.
962.
将马立克氏病病毒(MDV)血清Ⅰ型Rispens株接种原代鸡胚成纤维细胞(CEF),待出现80%以上细胞病变后收获,提取细胞和病毒的总DNA,以此为模板,根据B抗原基因核苷酸序列设计一对引物,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出一条约2.85k的特异性条带,双酶消化后克隆至质粒pUC19,酶切分析表明该病毒的B抗原基因上HindⅡ、EcoRⅤ、BamHⅠ、EcoRⅠ的酶切位点分布与RB1B株、GA株的 相似文献
963.
植物基因的克隆与转化研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
朱玉贤 《河北科技大学学报》1999,20(2):5-9,28
综述了近20a来植物基因工程、特别是DNA重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣,将有助于广大青年学者了解并掌握现代分子生物学的最新动态 相似文献
964.
BAC-FISH技术是90年代开始发展起来的一种新的定位技术。由于该技术较常规FISH技术的信号检出率高得多,运用该技术已将一些重要抗性基因定位到水稻染色体上。随着该技术的不断发展,将在栽培稻和野生稻比较作图研究中发挥更大的作用。 相似文献
965.
建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变.设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法.对85例非小细胞肺癌标本提取的基因组DNA,应用HRM基因突变分析方法和直接测序的方法检测了AKT1基因的E17K突变情况.经优化后,设计的引物在不对称PCR反应条件下可扩增出良好的条带.检测探针与野生型模板的扩增产物杂交后,其解链温度要高于与突变型产物杂交的解链温度.野生型和突变型的质粒模板所产生的熔解曲线可见显著差异,相应的Tm值相差约 3.5℃.经HRM基因突变分析方法和直接测序法检测,在85例非小细胞肺癌标本检测到1例AKT1基因的E17K位点为杂合突变型,其余均为野生型.本研究建立的对AKT1 E47K突变检测的HRM方法是一种灵敏、准确、快速的方法.另外,本研究仅在非小细胞肺癌患者中发现频率极低的AKT1 E47K突变. 相似文献
966.
以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8为载体经三亲本杂交用4组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12个转化子(T1 ̄和2),其抗性水平分布在10 ̄500mg/L的区间内,将这些转化子所含质粒分别命名为PSX1 ̄PSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T1 相似文献
967.
香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,SDS-酚法纯化的基因组RNA作为模板,RT-PCR合成并扩增外壳蛋白基因cDNA,cDNA克隆于pGEM-T easy vector,转化为E.coliJM109。阳笥克隆pTCaCP经序列分析,证明带有全长CP基因。 相似文献
968.
用聚合酶链反应(PCR)扩增了编码HBVsAg的基因序列,将其插入到pcDNA3载体中,位于人巨细胞病毒(CMV)早期启动子下游,重组质粒pcDNA3-sAg转染细胞后检测到HBsAg表达,用纯化后的重组质粒直接注射用BALB/C小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗HBsAg特异性抗体,PCR扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源HBVDNA整合。 相似文献
969.
970.
PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR法,以一组人抗体重链和轻链简并引物,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd和κ轻链基因.结果提示:用Trizol试剂提取细胞总RNA,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链,再经PCR扩增的方法,是值得优先采用的方法.细胞总RNA的提取不必追求高纯度,少量外周血即足以满足构建抗体库所需,简并引物可获得良好的扩增效果,为构建噬菌体抗体库奠定了基础 相似文献