野生侧耳分子鉴定及生物栽培转化技术的研究

野生菌栽培具有重要的经济价值。本文报道了分离培养野生侧耳属菌株PO1,并进行生物栽培转化的实验结果。以真菌试剂盒提取的PO1基因组DNA为模板,PCR扩增获得了大小为636 bp的ITS序列（GenBank No.MT261808.1）。运用ClustalX和MEGA软件的NJ法构建了侧耳属代表种的系统发育树,结果显示,PO1与NCBI中其他54株侧耳菌株亲缘关系较为密切,相似性达99.04%以上。明确野生侧耳为糙皮侧耳菌株分类后,总结出一套侧耳室内生物栽培转化技术与管理体系,栽培转化的糙皮侧耳PO2头潮菇和二潮菇产量高、口感好,经济效益佳,转化率高达158%,达到实验室侧耳高产栽培的目的,为大棚栽培管理技术提供了重要参考依据。     

电诱导侧耳属细胞种间融合的研究

采用聚乙二醇法,电场法和改进的聚乙二醇加电脉冲法诱导侧耳属细胞种间融合.用5个强度为10kV/cm,宽度为20μs的高压方波电脉冲处理经7％聚乙二醇(M.W.6000)作用凝集的两亲本原生质体,获得的融合物经双抗性遗传标记和结菇实验筛选,最终得到6株稳定的融合子.6株融合子与双亲有明显差异.实验结果表明,改进后的融合法对侧耳属细胞种间融合是一种有效的方法,具有较高的融合率和再生率,分别达到3.4×10~(-3)和5.6×10~(-3).     

截短侧耳素的HPLC测定

建立了HPLC法测定截短侧耳素的含量,采用Agilent Extend C8色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-0.02 mol.L-1的磷酸二氢钾缓冲液(35∶10∶55,体积比),流速为1.00 mL.min-1,检测波长为205 nm。截短侧耳素质量浓度在40~2 400μg.mL-1范围内线性关系良好(r2=0.999 9),定量限为0.08μg,检测限为0.04μg。