酵母α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达

酵母编码α-半乳糖苷酶的基因MEL1被扩增并克隆到表达载体pRSET中,重组质粒pRSET-Gal转化至相应的受体菌BL21（DE3)）PlysS,阳性克隆经液体培养和IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析,在50kD处有一目的分子大小的亮带,裂解细菌后经X-α-Gal的显色底物反应,液体变蓝．试验表明：α-半乳糖苷酶基因MEL1在大肠杆菌中得到了表达,糖基化对于维持此酶的生物活性不是必须的。     

灌木柳SlSIP基因的克隆和功能验证

【目的】明确灌木柳碱性α-半乳糖苷酶基因(SlSIP)的结构特征和该基因在耐盐方面的生物学功能,为碱性α-半乳糖苷酶基因新的功能拓宽提供理论基础。【方法】 以灌木柳苏柳‘2345’(Salix jiangsuensis ‘2345’)盐胁迫48 h后的cDNA为模板,克隆了苏柳碱性α-半乳糖苷酶基因SlSIP。运用生物信息学方法分析其蛋白质结构、性质和亲缘关系,利用农杆菌介导法转入拟南芥中,通过实时荧光定量qRT-PCR方法鉴定转基因阳性植株的表达特性和盐胁迫条件下的生长状态,从而验证转基因植株的耐盐功能。【结果】该基因编码776个氨基酸,分子质量为84.88 ku,理论等电点为5.85,不稳定系数为35.74,亲水性平均系数-0.154, 定位于内质网膜上。SlSIP的保守结构域为WFGWCTW和IDDGWQ,催化活性位点为V。共得到11个T3代阳性转基因株系,qRT-PCR结果显示SlSIP在3个拟南芥阳性转基因株系中表达量最高,分别提高9、28、29倍。转基因株系在含85 mmol/L NaCl培养基上种子萌发率高于非转基因植株,且生长状态良好,但非转基因植株的叶绿素含量高于转基因株系。【结论】SlSIP基因属于GH27家族,不仅提高了种子萌发过程中的耐盐性,也参与了叶片发育和衰老的途径。     

四君子汤对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和线粒体DNA(mtDNA)损伤的影响

目的 探讨四君子汤(Sijunzi decoction,SJZ)对D-半乳糖诱致衰老小鼠脑抗氧化能力和线粒体DNA(mtDNA)损伤的影响.方法 给小鼠连续皮下注射D-半乳糖(1000 ms/(kg·d-1))8周制备衰老模型,并于第3周开始给予四君子汤高剂量组(20 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、低剂量组(5 g/kg)和维生素E(250 ms/kg)处理;8周后采用水迷宫测定小鼠学习记忆能力;采用比色法测定脑组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活力;Fura-2/AM双波长荧光法检测海马神经细胞钙离子浓度;常规PCR检测小鼠海马细胞mtDNA缺失突变.结果 四君子汤可明显改善模型小鼠的学习和记忆能力,并提高脑组织GSH-PX和SDH的活力,降低脑细胞内钙离子浓度,防止模型小鼠脑海马细胞mtDNA缺失突变.结论 四君子汤具有改善D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的作用,其作用与其提高脑组织抗氧化能力,降低海马胞内钙离子浓度,减轻细胞线粒体DNA缺失突变的作用有关.     

用基因重组α-半乳糖苷酶进行B→O血型改造

α-半乳糖苷酶是进行B→O血型改造的工具酶. 采用RT-PCR方法, 从中国海南Catimor咖啡豆中克隆了全长1.1 kb的α-半乳糖苷酶cDNA, 并构建了其表达载体. 电穿孔法将载体导入毕赤酵母GS115细胞, 筛选出重组α-半乳糖苷酶菌株. 离子交换层析纯化出α-半乳糖苷酶, 酶比活性从15 U/mg 提高到28.14 U/mg. 进一步鉴定了酶的生物化学性质, 其K_m = 0.275, V_max = 0.014 mmol·L^-1·min^-1. 据此确定了B→O血型改造的条件: pH 5.5~5.6, 每毫升红细胞使用100 U α-半乳糖苷酶, 26℃, 4 h. 经动物输血实验初步证明, 酶解反应后的通用O型血(enzymatically converted group O red blood cells, ECORBC)是安全的.     

大豆黄酮对衰老小鼠脑组织3种氧化酶水平的调节

观察大豆黄酮对D 半乳糖致衰老小鼠脑的抗衰老作用.连续背部注射D 半乳糖6 周,造衰老模型,然后灌胃大豆黄酮5周(实验组Ⅰ,Ⅱ的剂量分别为10,5 mg·kg-1·d-1),取脑测定脑组织中谷胱苷肽过氧化物酶(GSH Px)、一氧化氮合酶(NOS)、单胺氧化酶(MAO)的活性.结果显示:与衰老对照组相比,实验组Ⅰ,Ⅱ的NOS,GSH Px活性均有提高,而MAO含量降低.表明大豆黄酮能增强衰老小鼠脑的抗氧化作用,提高其学习记忆能力.     

益智Ⅱ号促进小鼠记忆保持的观察与分析

比较分析复方中药益智Ⅱ号影响动物记忆保持的主要成分及其对D-半乳糖所致记忆障碍的作用.应用中药拆方方法和一次性被动回避反应模型,分别给动物灌胃同等剂量的益智Ⅱ号、五味子和远志,观察小鼠步入潜伏期及记忆保持率的变化.结果显示:①益智Ⅱ号、五味子和远志均能显著延长小鼠的步入潜伏期(P<0 05或P<0 01),五味子药效较益智Ⅱ号和远志的为强;五味子能明显延长小鼠的记忆保持率,延缓记忆的消退(P<0 05),而益智Ⅱ号和远志对动物的记忆保持率没有明显的影响(P>0 05).②D-半乳糖显著降低动物的步入潜伏期和记忆保持率(P<0.05);而五味子却能对抗D-半乳糖所致的记忆障碍,明显延长动物的潜伏期和记忆保持率(P<0 05或P<0 01).     

老年人 走出饮用纯牛奶的“误区”

牛奶含有丰富的矿物质及微量元素，蛋白质营养价值极高，而且胆固醇含量低，是一种老幼皆宜的营养保健饮料，特别是纯牛奶更是受到老年人青睐。但在日常生活中。一些老年人在饮用纯奶后却出现腹鸣、胀气、腹泻等乳糖不耐受症状。事实上，老年人在饮用牛奶上存在一定的“误区”。     

近临界水中乳糖尿素树脂胶黏剂的合成

以乳糖代替甲醛与尿素在近临界水中反应,合成了一种类似于脲醛树脂的绿色环保型树脂胶黏剂.以产物粘度为指标,首先对催化剂的种类进行了选择,并在单因素实验的基础上采用响应面分析法对其他实验条件进行了优化.通过对粘度与各影响因子之间的回归方程和响应面图的分析,得到了乳糖-尿素树脂胶黏剂合成的最佳工艺条件:催化剂用量1.71 g...     

乳糖对小鼠运动能力的影响研究

以糖作为能量补充的基点,昆明小鼠作为实验对象,将小鼠分为对照组(C)、空白运动组(B)和服用乳糖组(L),研究补充乳糖对减缓昆明小鼠运动性疲劳的作用,以提高小鼠的运动能力.结果表明:(1)在小鼠运动前补充乳糖能减少血液中的乳酸;(2)游泳力竭运动后,空白运动组的小鼠的血糖浓度有一定程度的下降,且下降趋势明显,而服用乳糖组小鼠的血糖浓度下降不大.说明补充乳糖后,可以提高小鼠的运动能力.     

复方葛根片对衰老大鼠胸主动脉损伤的保护作用

为研究复方葛根片对D-半乳糖致大鼠衰老后血清中同型半胱氨酸（Hcy）水平的影响及胸主动脉损伤的保护作用,将大鼠分为模型组,正常组,复方葛根片高、中、低剂量组。采用皮下注射D-半乳糖的方法制备大鼠衰老模型,运用AU5800全自动生化仪测定血清中Hcy的含量,运用SPSS16分析各Hcy含量和体重差异。对大鼠胸主动脉进行HE染色,在光镜下观察血管的组织病理学病变。研究结果表明,模型组与正常组以及各给药组与模型组的Hcy水平、体重均存在显著性差异(P<0.01)）。复方葛根片各剂量组对胸主动脉血管具有不同程度的保护作用,高剂量组的保护作用最明显。 研究认为复方葛根片能降低D 半乳糖致衰老大鼠血清中Hcy水平,并对胸主动脉的血管损伤具有保护作用。