响应面法优化菌株Serratia proteamaculans sp. L 3产冷活性β-半乳糖苷酶

为了开发工业用酶,在前期菌株筛选的基础上,利用Design-Expert软件,通过Plackett-Bru-man设计与响应面法(RSM)相结合的实验统计方法实现对Serratia proteamaculans sp.L 3菌株产冷β-半乳糖苷酶培养基成分的优化.Plackett-Burman设计筛选出3个显著影响因子:K2HPO4,MgSO4和NaCl,应用中心组合设计和响应面分析确定产酶的最优组合为:K2HPO40.15 g·L-1,MgSO40.50 g·L-1,NaCl 0.76 g·L-1,此时预测的最高A420为0.370 4.经过验证实验,结果表示最佳产酶培养基成分条件下,优化后降解ONPG的能力提高了1.1倍.本研究为微生物β-半乳糖苷酶的后续工业化应用提供理论依据.     

酿酒酵母α-半乳糖苷酶基因重组菌株的表达分析

PCR扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)2个α-半乳糖苷酶基因agl2和agl3,将其分别与表达载体pY-ES2连接,电转化酿酒酵母(Saccharom yces cerevisiae)INVScl菌株.从重组菌株提取载体进行单酶切凝胶电泳检测,证实agl2和agl3分别在重组菌株AGL2和AGLs表达.以葡萄糖和棉子糖为碳源培养菌株,2株重组菌的生长速率均显著高于原始菌株,提前8h菌数达到最大,其中以AGL3的生长速率提高较为明显,重组还使菌株在液体培养基由原来的部分絮凝转变为完全游离状.2株重组菌株均不能利用蜜二糖为碳源生长.     

Paenibacillus sp.K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从鲜牛奶中分离到1株产β-galactosidase的细菌,经16S rDNA序列比对鉴定为类芽孢菌Paenibacillus sp. K1。提取该菌株的染色体DNA,以pUC18（lac-）为载体,构建其DNA文库;在含有X-gal的LB平板上筛选该文库,得到6个蓝色菌落;对阳性克隆中插入的DNA片段序列测定,鉴定出1个编码全长为2028bp并携带有组成型启动子的β-半乳糖苷酶基因。将该基因导入大肠杆菌BL21（DE3）中,实现了β-半乳糖苷酶高效表达,其酶活为25.06U/mL,高于原始菌株的4.55U/mL,并进一步用亲和层析将该酶进行了纯化。     

猕猴桃籽油对大鼠睾丸的抗衰老影响

通过观察猕猴桃籽油对D－半乳糖造模衰老大鼠睾丸超微结构的影响,探讨猕猴桃籽油延缓性腺功能减退的作用机理.将18只SD大鼠随机分为3组,正常组每鼠灌服生理盐水和背部皮下注150 mg.kg^-1.d^-1生理盐水,模型组每鼠灌服生理盐水和背部皮下注射150　mg.kg^-1.d^-1　25%　D-半乳糖溶液,猕猴桃籽油干预组每鼠灌服猕猴桃籽油0.670　g.kg^-1.d^-1和背部皮下注射150　mg.kg^-1.d^-1 25%　D-半乳糖溶液.每组实验时间均为8周,8周后透射电镜下观察各组大鼠睾丸超微结构的变化.结果显示,与模型组比较,猕猴桃籽油可以显著改善间质细胞、支持细胞、精原细胞的退行性改变.说明猕猴桃籽油可改善衰老大鼠睾丸间质细胞、支持细胞、精原细胞的退行性改变,具有一定延缓性腺衰老的功能.     

绞股蓝、山楂提取物对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠抗氧化作用的实验研究

目的 研究绞股蓝、山楂提取物的协同抗氧化活性,探讨抗衰老作用机制.方法 小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,灌胃给予不同剂量的绞股蓝、山楂提取物,检测小鼠血液和肝脏组织中的丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Pa)的活力.结果 绞股蓝、山楂提取物协同能显著降低衰老模型小鼠血清和肝组织MDA水平,同时可提高GSH-PX活力水平.结论 绞股蓝、山楂提取物协同具有显著的抗氧化作用,对衰老的自由基学说提供有力的支持.     

麦芽糖、乳糖为底物B-Z体系的非线性动力学行为

麦芽糖(乳糖)-丙酮-Mn^2 -BrO3-H2SO4体系相继出现低频和高频两种振荡，底物浓度、温度等对振荡都有明显的影响，ATP加入有显著的干扰作用。对出现的丰富的非线性动力学行为进行研究，并对其机理作初步的探索。     

1-溴-2,3,6-三-O-乙酰基-4-氯-α-D-半乳糖的合成

以蔗糖为起始原料,经缩水、水解反应制得4-氯-α-D-半乳糖,然后通过乙酰化、溴化反应,制得1-溴-2,3,6-三-O-乙酰基-4-氯-α-D-半乳糖,总收率可达74.0%.本合成方法操作简单、条件温和,收率较高,适合大量制备.     

酸樱桃汁对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆功能的影响

目的 检测酸樱桃汁对D-半乳糖致衰老小鼠模型学习记忆功能的影响.方法 颈背部皮下注射 D-半乳糖120mg/(kg·d-1)连续56d建立亚急性衰老模型,同时灌胃给予不同剂量的酸樱桃汁进行治疗,治疗8周后,分别采用跳台实验、Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力.结果 跳台法检测结果显示:酸樱桃汁能延长D-半乳糖致衰老模型小鼠的潜伏期,减少错误次数;Morris 水迷宫实验结果显示:酸樱桃汁能使D-半乳糖致衰老模型小鼠平均潜伏期明显缩短,跨过平台次数显著增加.结论 酸樱桃汁能有效提高D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力.     

乳糖诱导大肠杆菌中重组谷氨酰胺合成酶的表达

以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶（L-谷氨酸：氨连接酶,Glutamine Synthetase,GSEC6.3.1.2）蛋白表达宿主菌株BL21（DE3）（pET3C／谷氨酰胺合成酶）作为研究对象,借助SDS-PAGE分析方法,对于用乳糖诱导由T7lac启动子控制的重组目的产物蛋白的表达规律进行了优化研究,分别比较了最佳诱导起始生长量、所需乳糖的浓度、诱导持续时间、补加乳糖和氨苄青霉素及不同培养基等参数对重组产物表达的影响．实验结果表明,对于T7lac启动子控制的重组目的产物,乳糖作为诱导剂也可以起到很好的诱导表达效果,诱导产物的表达量、可溶性及酶活与IPTG诱导产物基本接近．本研究结果为乳糖作为诱导剂应用于重组大肠杆菌谷氨酰胺合成酶工业化生产提供了一定的参考依据．     

姬松茸多糖酶降解对D-半乳糖诱导3T3细胞氧化损伤的保护作用

目的优化并建立姬松茸多糖(Agaricus blazei polysaccharide,ABP)的酶解工艺,探讨其对D-半乳糖诱导小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)衰老的保护作用.方法采用响应面法检测姬松茸多糖最佳酶解工艺;用D-半乳糖诱导氧化损伤;采用噻唑蓝(MTT)法检测各时期细胞活力;测定抗氧化指标.结果姬松茸多糖最佳酶解工艺:加酶量为2.9%,温度为59℃,时间为2.1 h,该酶解方法姬松茸多糖提取率为11.18%.选取培养48 h的3T3细胞进行自由基活性检测,其中模型组与对照组比较细胞存活率降低,差异具有统计学意义(P0.01).给药组与对照组比较细胞存活率增加,在给药终浓度为100μg/mL时,细胞恢复效果最佳,细胞内SOD活力升高(P0.05),CAT活力降低(P0.01),MDA含量显著减少(P0.01),差异具有统计学意义,并且呈现剂量依赖性.结论该方法建立了高效、稳定的姬松茸多糖酶解工艺,获得的姬松茸多糖能够抑制细胞氧化损伤,对D-半乳糖诱导的3T3细胞衰老具有保护作用.