杂合启动子控制下乙肝病毒表面抗原SA-28融合基因在酵母中的表达

在杂合启动子ＡＤＨ２－ＧＡＰＤＨ控制下于酿酒酵母中表达乙肝病毒表面抗原ＳＡ－２８融合基因的过程研究中,确定系统表达的有效阻遏条件为在１０．０ｇ／Ｌ的葡萄糖浓度下进行细胞的预培养,采用稀释操作和碳源饥饿培养等较彻底的支阻遏方式以克服葡萄糖酵解产物阻遏对表达的影响。实验还显示了溶解氧浓度对表达的影响和乙醇流加方式对表达期酵母生长与表达的调节作用。实验获得主培养４５ｈ后湿菌体浓度为１８６ｇ／Ｌ,细胞内ｐ     

对童氏“7.5B”计算及乙型水驱法的改进

研究了童宪章院士“7.5B”的准确性和适应性,指出了“7.5B”方法只适用于多个油田的统计计算,而不完全适应于单一油藏。从理论上推导了“7.5B’’的数学表达式,给出了一条准确计算该值的有效途径。对童氏水油比与采出程度关系乙型水驱法及采出程度与含水关系图版作了改进。     

丙型肝炎病毒NS3基因真核质粒的构建及其在人肝细胞中的诱导表达

目的：进行丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因真核表达载体的构建,并分析其在体外培养的人肝细胞中的表达。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1-3011表达载体中PCR扩增出HCVNS3基因片段,将其与表达载体pcDNA3．1（-）重组,得到重组的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,以免疫组织化学SP法及Western Blotting检测HCVNS3蛋白的表达。结果：所得到的NS3片段正确,序列正确,所构建的真核质粒成功转染QSG7701细胞并表达蛋白,表达的NS3蛋白相对分子质量为70000。结论：成功构建了丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的真核表达载体pcDNA3．1（-）／NS3,并且该载体在体外培养的人肝细胞中能有效表达特异性HCVNS3蛋白。     

两段发酵法培养重组酿酒酵母生产乙肝表面抗原

通过具有选择性压力合成培养基的使用和大豆蛋白胨的补加,建立了两段法重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原的发酵生产工艺,使总的抗原表达量比原始批培养提高了25%,单位菌体抗原表达量提高了68%。对合成培养基和过程进行了优化,降低了生产成本,使两段发酵法更适合于实际生产。通过测定发酵过程中质粒的稳定性,证明抗原产量的提高是由于质粒稳定性提高所致。     

福清城头镇人群乙肝血清流行病学调查结果

目的：为了解城头镇人群己型病毒性肝炎（乙肝）流行现状,评价实施乙肝疫苗免疫15年后,人群乙肝病毒（HBV）感染的血清流行病学变动趋势。确定城头镇人群乙肝的综合预防控制策略。方法：采用多阶段分层整群随机抽样方法,对全镇29个行政村1－59岁人群共1500人进行了乙肝血清流行病学调查,并用酶联免疫法检测了乙肝病毒表面抗原（HBsA曲、乙肝病毒表面抗体（抗－HBs）。结果：城头镇调查人群HBsAg、抗－HBs、阳性率分别是7．2％、52％,与1992年病毒性肝炎血清流行病学调查结果9．75％的HBsAg携带率相比全人群HBsAg携带率下降26．36％。结论：接种乙肝疫苗是控制人群HBV感染的有效措施,能明显提高抗－HBs阳性率,降低HBsAg携带率,提高人群对HBV的免疫保护能力。     

在HBV和(或)AFB1诱发树鼩肝癌过程中肝组织ras癌基因的表达

为了解在人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和／或黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）诱发树Ｑｕ肝癌过程中Ｐ＾２１在肝组织的表达情况,用免疫组化方法观察人ＨＢＶ＋ＡＦＢ１双因素组（Ａ组）、单因素ＨＢＶ组（Ｂ组）、单因素ＡＦＢ１组（Ｃ组）、及对照组（Ｄ组）实验第４４周、１０５周、１１９周动物肝活检组织Ｐ＾２１蛋白的表达情况。结果,至１１９周,累计肝组织Ｐ＾２１阳性动物百分率分别为３５．３、５．３、１３．３、０。表明人ＨＢＶ与     

西藏高校学生乙型肝炎表面抗原携带情况调查与分析

目的：了解西藏高校学生的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的携带情况,并分析其相关因素。方法：应用酶联免疫法（ELISA）检测1890名入校新生的HBV血清标志物,利用SPSS15统计学软件进行数据的录入和分析,率之间采用χ2检验。结果：1890名大学新生,其中男性1011名,女性879名;藏族1100名,汉族及其他民族790名;检出HBsAg阳性者为242例,阳性率为12.8%（其中男生为14.0%,女生为11.4%）,男女阳性率差异无统计学意义（χ2=3.000,P〉0.05）。比较城乡生源的阳性率,发现不同生源地入校新生阳性率比较差异无统计学意义（其中城市12.8%、农村13.1%,χ2=0.035,P〉0.05）。藏族与汉族HBsAg阳性率比较差异有统计学意义（藏族15.8%,汉族8.5%,χ2=21.213,P〈0.001）;藏族学生HBsAg阳性率分地区比较差异无统计学意义（拉萨14.8%、日喀则5.7%、林芝13.4%、山南14.4%,χ2=0.383,P〉0.05）。结论：西藏高校学生乙肝表面抗原阳性率高于全国平均阳性率。应加强教育,定期注射乙肝疫苗,增强抗病能力,有效控制乙肝在高校的传播。     

乙肝表面抗原在分泌型毕赤酵母中的表达及纯化

目的对分泌型毕赤酵母中表达乙肝表面抗原并进行亲和层析纯化。方法从已确诊的乙肝患者阳性血清中提取乙肝病毒DNA,PCR扩增乙肝病毒表面抗原编码基因S,将其插入含有仅分泌信号肽序列和6个组氨酸纯化标签的毕赤酵母表达载体pPICZα,成功构建了重组表达载体pPICZα—HBVs。电转化酵母菌株GS115,得到重组乙肝表面抗原S的酵母表达菌株。结果诱导培养基BMMY中甲醇终浓度为1％,诱导表达48h重组蛋白表达量及抗原性达到最高。非变性条件下亲和层析纯化后,薄层扫描分析得到纯度超过95％,表达量约为2mg／L的重组蛋白。结论Western-blot和ELISA分析表明,所得产物为乙肝表面抗原S蛋白,其纯度和产量足以免疫小鼠制备单克隆抗体。     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的:探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义。方法:本文用酶联免疫分析(enzymelinkedimmuno-adsorbedassay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescencequantitativepolymemsechainreaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA。结论:在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标。