中科院广州生物医药与健康研究院:丙肝病毒包装释放研究获进展

正近期,中科院广州生物医药与健康研究院发现,人肝细胞核因子-4α(HNF4α)在丙型肝炎病毒(HCV)的包装和释放过程中发挥着重要作用,其下游因子磷脂酶A2GXIIB(PLA2GXIIB)和微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)共同参与其对HCV包装和释放过程的调控。该研究提示了HCV可能利用HNF4α来挟持VLDL通路为己所用。相关研究成果已于近期在病毒学杂志(Journal of Virology)上在线发表。HNF4α是表达量最高的肝细胞     

前S1抗原的检测及其与HBV血清标志物之间关系的探讨

目的了解前S1抗原和乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物常见模式之间的关系,探讨前S1抗原检测的临床意义.方法采用双抗体夹心ELISA法对269例HbsAg阳性血清进行前S1抗原检测,并与相应的HBV血清标志物模式进行比较分析.结果HbeAg阳性组的前S1抗原阳性率无显著差别(P>0.05),HbsAg阳性组的前S1抗原阳性率也无显著差别(P>0.05).而HbeAg阳性组和HbsAg阳性组之间前S1抗原阳性率则存在显著差别(P<0.01),后者阳性率较高.结论前S1抗原与HBV血清标志物之间有一定关系,临床上宜将两者结合起来检测,综合判断.     

原儿茶酸与拉米夫定体外联合抗HBV药效学研究

为观察拉米夫定(3TC)与原儿茶酸(PA)联合应用抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,在HepG2.2.15细胞培养液中分别加入适当浓度的3TC、PA、3TC+ PA溶液,每4d换用含相同药物浓度的新鲜培养液,第8天末取上清液,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测上清液中HbsAg和HbeAg的量,用荧光定量PCR( F...     

丙型肝炎病毒抗体快速诊断试剂的方法学研究

通过将抗原片段用点膜仪固相在硝酸纤维素膜上,依次加入标本、生物素标记的IgG、链霉亲和素-碱性磷酸酶,最后加底物显色,建立一种快速、敏感、实用的丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测方法.结果表明,整个检测过程仅需15～25 min,操作简便,已通过"第3代ELISA抗-HCV诊断试剂国家参考品".该方法简便、快速,结果易判断,既有ELISA的特异性和灵敏性,又有金标记法的检测速度;既适合输血筛查实验,又适合临床常规检查.     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

分子信标连接体系用于核酶切割产物的超灵敏检测

建立了一种新的核酶切割产物的超灵敏检测方法. 利用分子信标作为核酶切割产物的连接模板和检测分子, 在RNA/DNA核酸杂合体连接过程中, 核酶切割产物的信息被实时转换为荧光信号. 该方法实现了在不标记核酶或RNA底物的情况下, 高灵敏、高特异性地检测核酶切割产物, 检测下限可达 0.05 nmol/L. 为真实准确地反映核酶切割反应提供了一种简便快捷的非同位素分析方法, 也为核酶基因药物的快速筛选、核酶动力学、核酶在基因治疗中的深入研究提供了全新的思路和技术. 应用该方法对丙型肝炎病毒锤头核酶的切割产物进行了检测.     

血液筛查中核酸检测与ELISA联合应用的研究

通过对血浆标本的核酸和血清学检测结果进行比较分析,探讨核酸检测（NAT）与酶联免疫吸附试验（ELISA）联合应用在血液筛查中的意义.研究从血浆样本中同时提取HBV、HIV和HCV核酸,采用荧光实时聚合酶链反应（PCR）进行检测,同步进行ELISA检测HBV、HIV和HCV抗原或抗体.在5 184份血浆标本中检测出HBV“窗口期”标本12份,检出率为0.23％;检测出HCV“窗口期”标本3份,检出率为0.058％;未检测出HIV“窗口期”标本.从而得出结论,核酸检测可以有效检测出血浆中的HBV、HIV和HCV的“窗口期”标本.     

Ⅰ型鸭肝炎病毒(MY株)活疫苗毒种的纯粹及生产条件探索

将Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株进行纯粹检验；以100ELD50 0.2mL/枚(含病毒3.0×105个拷贝)剂量经鸡胚尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,每隔12h观察并采集鸡胚胚体和尿囊液样本,运用自行建立的检测DHV-1的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法检测MY株弱毒的鸡胚增殖规律.结果表明,该毒种符合...     

慢性乙型肝炎发生、发展的免疫学机制及治疗新策略研究

乙型肝炎病毒(HBV)所致的慢性乙型肝炎,在当前和今后相当长时期内仍是危害我国人民健康的主要传染病之一.尽管经过推广新生儿乙肝疫苗接种使我国人群中HBsAg携带率由9.8％下降至7.18％,但我国仍属乙肝病毒感染较高的地区,仅现症的慢性乙型肝炎患者约3000万人,每年因慢性乙型肝炎相关疾病造成约30万人死亡.机体感染乙肝病毒后其临床转归比较复杂,有的可长期呈病毒携带状态(免疫耐受),有的则可在10～20年内进展至肝硬化乃至原发性肝癌.据统计约有10％～25％的慢性乙型肝炎病毒感染患者最终发展成HCC.     

增强化学发光酶免疫分析法测定人血清中的乙型肝炎表面抗原

采用对碘苯酚增强的Ｌｕｍｉｎｏｌ－Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ化学发光反应体系作为免疫分析的最终检测方法，建立了一种新的乙型肝炎表面抗原的化学发光酶免疫分析方法（ＣＬＥＩＡ）。通过对２．０×１０－１０ｇ／ｍＬＨＲＰ连续１１次测定的相对标准偏差为３．５％，用该方法对人体血清中的乙型肝炎表面抗原进行了测定，其结果与ＥＬＩＳＡ法所得结果一致。