SAM自由基酶研究进展:新反应与新机制

S-腺苷-L-蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine, SAM)自由基酶是当今酶学领域的研究热点.该类酶通过结合的辅因子SAM和[4Fe-4S]簇催化生物体中一系列重要的自由基反应,自2001年被正式命名以来,成员不断壮大,目前已成为最大的酶家族之一.近年来, SAM自由基酶领域有大量新反应和新催化机制被报道.本文对近5年部分代表性成果进行酶催化机制的介绍,内容涉及核糖体肽翻译后修饰、核苷类化合物以及多种小分子生物合成.通过底物分类,让读者更容易理解SAM自由基酶催化反应的广泛性与多样性.同时对该领域新发现的新颖的有机金属催化自由基反应机制进行了介绍,并对SAM自由基酶领域的未来发展方向进行展望.     

基于化学荧光法的双黄连口服液神经氨酸酶抑制活性测定

建立流感病毒神经氨酸酶体外活性荧光检测法测定双黄连口服液的NA抑制生物活性.采用化学荧光法测定双黄连口服液对神经氨酸酶的抑制率.结果表明,反应后溶液荧光强度与产物4-MU浓度在0.1~1.2μg/m L内成良好的线性相关系(Y=39482X-254.05(r=0.9994)),该测定方法的精密度与重复性良好,反应后溶液在4℃条件下4 h内稳定,双黄连口服液对流感病毒神经氨酸酶的抑制率高达64.20%.该方法可用于测定双黄连口服液对神经氨酸酶抑制活性测定.     

接种疫苗防流感

<正>又到秋冬之交,我国很多地方开始进入流感高发期。流感是由不同类型的流感病毒引起的,历史上的流感大流行曾经造成数千万人的死亡。接种流感疫苗是控制与预防流感大规模流行的有效办法。     

槐花米提取物对尿素酶的抑制活性

采用靛酚法研究了槐花米的乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷提取物对尿素酶的抑制作用，证实3种提取物均对尿素酶有明显抑制作用，IC₅₀分别是2.63，1.90，0.53 g/L.通过动力学研究阐明了提取物对尿素酶的抑制行为是可逆的混合型抑制，动力学常数K_i分别为0.32，0.22，0.084 g/L.首次阐明了槐花米中含有尿素酶抑制成分，为槐花米具有健胃、养胃的功效提供了一种理论解释.     

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶在儿科疾病中的临床应用

尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）是在临床应用最广泛的诊断肾脏病变的酶之一,NAG主要来自近曲小管的溶酶体,尿中含量相对稳定,其排泄异常提示肾脏损害,因此是肾小管损伤的敏感标志物,在很多儿科疾病中可以判断是否有肾脏损害和（或）严重程度。     

毛尖紫萼藓1-半胱氨酸过氧化物酶基因GpPER1的克隆、表达载体构建及序列分析

从本实验室已成功构建的毛尖紫萼藓干旱cDNA文库中获得一条与抗旱相关的基因,即1-半胱氨酸过氧化物酶(1-Cys peroxiredoxins)基因,简称GpPER1,GenBank登录号为GU989314,该基因全长1040bp,开放阅读框(ORF)为666 bp,编码221个氨基酸。根据GpPER1基因的开放阅读框设计特异性引物,通过RT-PCR技术扩增得到GpPER1基因片段,并成功构建了表达载体pRI 101-GpPER1,为进一步在分子水平上研究毛尖紫萼藓的耐旱机制,发现并利用植物的抗逆基因奠定了基础。     

低温对两种油茶的生理生态效应

以广西油茶和湖南油茶为试验材料,研究在温度梯度下,两种油茶幼苗叶的最大光化学效率(Fv/Fm)和油茶中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等抗氧化物酶的酶活性变化.结果表明:(1)温度使两种油茶的最大光化学效率(Fv/Fm)有所下降,但影响不明显.(2)低温处理后,广西油茶过氧化氢酶活性在20℃时最高,湖南油茶过氧化氢酶活性在15℃时最高;两种油茶中的超氧化物歧化酶活性均在20℃时最高;广西油茶中过氧化物酶活性在15℃时最高,湖南油茶过氧化物酶活性在10℃时最高.     

钒酸铵对肝微粒体谷胱甘肽过氧化物酶活性影响

研究钒酸铵对小白鼠肝微粒体中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响.采用钙沉淀法制备小白鼠肝微粒体,用GSH-PX试剂盒测定GSH-PX的活力.结果表明试验组与对照组相比,最小剂量组差异不显著(p＞0.05),其余试验组差异均极显著(P＜0.01),并且酶活性随着钒酸铵剂量的增大而降低.证明钒酸铵能降低小白鼠肝微粒体中GSH-PX的活性.     

转APX基因烟草抗旱能力研究

用毛白杨中克隆得到的抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因,构建植物表达载体pBI121-APX,将pBI121-APX载体用农杆菌介导法转化烟草,成功得到转基因烟.PCR、PCR-Southern的结果表明,APX基因已经成功的整合到转基因烟草基因组中.干旱实验结果表明,与对照相比较,转基因烟草表现出较强的抗旱性.     

薏米及其蛋白酶解物的抗氧化性能

采用碱提酸沉方法制备薏米蛋白,测定DPPH自由基清除率,检测产物的抗氧化活性.薏米蛋白的干燥方式以采用冷冻干燥和30℃普通低温干燥可以保持较高的抗氧化活性.复合蛋白酶获得的酶解物抗氧化活性较高,其次为中性蛋白酶及碱性蛋白酶.薏米蛋白酶解产物的抗氧化能力远大于薏米,并随着薏米活性肽质量分数的增加,其抗氧化能力也随之增强....