黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及其植物表达载体的构建

黄瓜花叶病毒(CMV)是一种正链RNA病毒,在全世界分布很广,至少可侵染85科365属中的757种植物.将经过改造的CMV复制酶基因导入植物,可获得比导入外壳蛋白基因等抗性水平高、时间长的工程植株.本文首次报道了中国株系CMV复制酶基因的克隆及其核苷酸序列,构建了3’末端不同长度缺失的植物表达载体.     

假单胞菌DM11的二氯甲烷脱卤素酶研究──Ⅱ．动力学性质和抑制剂

对来自假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶（简称ＤＭ１１脱卤素酶）的动力学性质和抑制剂进行了研究。用１／Ｖ对１／［ｓ］作图法，测出ＤＭ１１脱卤素酶以ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｂｒ２、ＣＨ２Ｉ２、ＣｌＣＨ２Ｂｒ和ＣｌＣＨ２Ｉ等５种化合物为底物时的Ｋｍ值分别是６７、２０、５５、７和９μｍｏｌ／Ｌ，比活力分别是７７．８、１２３．３、７８．８、５６．１和６０．３ｍｋａｔ／ｋｇ蛋白。测定了１４种抑制剂对ＤＭ１１脱卤素酶的５０％抑制浓度（Ｉ５０）。甲基谷胱甘肽（ＧＳＣＨ３）是ＤＭ１１脱卤素酶的竞争性抑制剂，四硝基甲烷（ＴＮＭ）是非竞争性抑制剂，当甲基谷胱甘肽和四硝基甲烷与ＤＭ１１脱卤素酶一起保温时，甲基谷胱甘肽对酶有保护作用。     

“脾主肌肉”的生化研究──若干酶指标活性的测定

为了探讨“脾主肌肉”的机理，利用脾气虚的模型动物，测定肌肉、血液中与肌肉能量代谢物质代谢有关酶活性的变化，从这些指标的变化来了解脾与肌肉的关系。脾气虚模型动物制作是依据我所已建立的模型。通过实验发现，脾气虚模型动物肌肉中能量代谢和物质代谢水平明显低于正常组。肌肉抽提液内源性ＡＴＰ（三磷酸腺苷）的含量，磷酸肌酸激酶活性，这些与能量代谢有关的指标，脾气虚组明显低于正常组。而与肌肉物质代谢有关的酶：乳酸脱氧酶、谷丙转氨酶、α－羟丁酸脱氢酶等酶的活性，脾气虚组也明显低于正常组。根据脾气虚模型动物实验表明：脾气虚，机体运化功能不足，肌肉中能量供应不足，物质合成低下，造成肌瘦无力。该实验方法为更深入地探讨“脾主肌肉”机理开创一条新路。     

β－胡萝卜素在盐生杜氏藻（Dunaliella Salina）中积累机理的研究

以不同光照条件下生长的盐生杜氏藻为材料，通过测定叶绿体基质蛋白的含量发现，在低光照下叶绿体基质蛋白的含量为２６．４０ｇ／Ｌ，而在强光照下叶绿体基质蛋白为１１．５０ｇ／Ｌ。对这两种蛋白进行平板电泳皆为一条带，而在ＳＤＳ－凝胶电泳，低光照下为五条带（五个亚基），其Ｒ＿（ｆ１）值分别为０．４０，０．５０，０．６０，０；７０，０．７８；强光照下有四条带（四个亚基），其Ｒ＿（ｆ２）分别为０．５０，０．５８，０．６８，０．８０。通过改变ｐＨ值、提高温度和紫外线照射等，发现该蛋白具有酶活性并与β－胡萝卜素的合成有关。     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

芦柑子叶培养中过氧化物酶活性及其同工酶的变化

以芦柑子叶为外植体，对脱分化产生愈伤组织至再分化产生器官的发育过程中过氧化物酶活性及同工酶谱变化的研究结果表明，再分化过程的酶活性高于脱分化过程，根分化过程的酶活性高于芽分化过程。同工酶分析揭示出１０条酶带，其中由子叶经愈伤组织到分化出芽的过程中先后出现了９条酶带，带５（Ｒ＿ｆ＝０．１６７）为这一过程所特有；由子叶经愈伤组织到分化出根的过程中也先后出现了９条酶带，带６（Ｒ＿ｆ＝０．２２５）为该过程所特有。     

DNA重组体技术在作物改良中的应用

引言近几十年来,DNA技术已获得重大进展。尽管遗传工程仍处在发展阶段,但它必将成为控制植物特性的一种强有力的工具,诸如除草剂与杂草的竞争性、光合效率、营养增强能力、应激忍耐力、固N能力和次生植物再生的生产。传统的常规遗传控制手段是进行品种改良的育种方法。植物的育种,就是从具不良性状的亲本杂交后代中选择优良性状,也许同时存在一个或两个以上的性状是不需要的。植物育种的一个典型的步骤,通常是通过选择优     

过氧化物酶活性部位的模拟及其催化显色反应的研究

本文合成了锰(Ⅲ)与meso-四(4-磺基苯)卟啉的螯合物(Mn-TPPS_4),研究了它作为过氧化物模拟酶对过氧化氢、4-氨基安替比林与苯酚显色反应的催化活性。拟订的光度法可准确地测定0～6μg/ml H_2O_2含量,1.5μg、8.0μg和40μgH_2O_2的平均回收率依次为95％、96％和100％。将显色反应与葡萄糖氧化酶催化反应偶联,测定了人血清中葡萄糖的含量,取得了满意的结果。     

高温对人红细胞的影响

高温用于恶性肿瘤的治疗是近年来颇受重视的工作,但高温处理不可避免地对肿瘤组织周围正常细胞也将产生影响。为了研究高温对正常细胞的影响,本文以人红细胞为实验模型,研究其细胞热损伤的机制。红细胞经不同温度处理二十分钟后,通过扫描电镜和生化分析方法探讨红细胞的形态变化,溶血作用和膜结合酶-乙酰胆碱酯酶、Na·K·Mg-ATP酶活性的变化。结果表明,在本实验条件下细胞形态的改变对高温最敏感:48℃高温处理后,绝大部分细胞变形,50℃保温使溶血显著增加,膜结合酶热变性温度则超过54℃。     

辣根过氧化物酶标记电化学聚合间苯二胺膜的研制

探讨了电聚合间苯二胺(PDA)膜的电化学聚合、活化及偶联辣根过氧化物酶(HRP)的条件及其性能,结果表明:制成的膜较薄(<1.0μm),在电极表面结合牢固,电聚合膜上有较多可供生物活性材料偶联的氨基,经戊二醛共价交联在膜上的HRP与膜结合牢固,在样品检测中性能稳定,重现性较好,使用及保存寿命较长,是制备生物传感器的良好膜材料,可望在免疫电极及微型电极方面应用。