碱性脂肪酶产生菌的筛选与产酶条件及酶学性质研究

作者从泸州油脂厂附近的土壤中,筛选到一株产碱性脂肪酶活性较高的细菌,经初步鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.).经对该菌株进行产酶条件和酶学性质研究发现,该菌株的最适产酶发酵培养基为(%):酵母浸出汁1.5,黄豆粉1,NaCl0.2,K2HPO40.2,NaH2PO40.2,MgSO4·7H2O0.01,初始pH8.5.100mL三角瓶装液10mL,30℃,150r/min摇床培养48h,酶活最高可达19.1U/mL.酶的最适反应温度40℃,最适pH8.5,该酶具有较好的热稳定性.     

大黄鱼cyp19a/b基因的克隆与表达分析

克隆得到了调节雌雄激素平衡的大黄鱼cyp19a/b基因,cyp19a基因c DNA全长1805 bp(NCBI登录号:FJ800566),其中开放阅读框1557 bp,编码518个氨基酸;cyp19b基因c DNA全长2268 bp(NCBI登录号:FJ800567),其中开放阅读框1503 bp,编码500个氨基酸.荧光定量PCR分析显示cyp19a基因在性腺中有明显的表达,且在卵巢中的表达量极显著且高于精巢;在肌肉、脑、肝脏、肾脏、脾脏等组织器官中基本不表达.而cyp19b基因在脑、脾脏和肝脏中有较高表达,在性腺和其他器官中基本不表达.     

斜带石斑鱼肝脂酶和脂蛋白脂酶基因克隆与序列分析

为从分子水平研究海水鱼类肝脂酶(hepatic lipase,HL)和脂蛋白脂酶(liportein lipase,LPL)基因在脂质代谢过程中的作用及其分子系统进化地位,采用RT-PCR及RACE法从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)肝脏克隆得到HL、LPL基因cDNA全序列.克隆获得斜带石斑鱼肝脏HL基因cDNA全长2 261 bp,其中5′非翻译区(5′-UTR)为186 bp,3′-UTR为590 bp,开放阅读框(ORF)为1 485 bp,编码494个氨基酸;LPL基因cDNA全长2 191 bp,其中5′-UTR为 144 bp,3′-UTR为 499 bp,ORF为1 548 bp,编码515个氨基酸.序列同源性分析表明,斜带石斑鱼HL、LPL基因与哺乳动物同源性均低于真骨鱼类罗非鱼、斑鳢和真鲷等,这与其亲缘远近关系相一致,表明HL、LPL在进化过程中都相对保守.构建系统发生树显示,斜带石斑鱼HL、LPL基因氨基酸序列与大口黑鲈、真鲷等共同占据进化树上独立的分枝,与较为原始的硬骨鱼类中华鲟在进化树上距离较远.本实验对斜带石斑鱼HL、LPL基因同源性、系统进化地位的研究,为进一步研究海水鱼类脂代谢调控机制,预防鱼类脂代谢疾病奠定了基础.     

几种枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶抑制作用比较

研究了6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力的影响．结果表明：6种中药枳壳乙醇提取物对酪氨酸酶活力均有显的抑制作用，除了绿衣枳壳外，其它5种中药枳壳的提取物随着含量的增大，酶活力呈指数下降．测定导致酶活力下降50％的6种中药枳壳提取物含量(JC50)分别为：0．92mg／mL(绿衣枳壳)、0．96mg／mL(陕西枳壳)、1．30mg／mL(红河橙枳壳)、0．44mg／mL(湖南枳壳)、0．41mg／mL(四川枳壳)、和0．70mg／mL(江西枳壳)，上述6种中药枳壳提取物对酪氨酸酶的抑制作用表现为可逆过程．抑制类型均为混合型，分别测定各种枳壳提取物对游离酶抑制抑制常数(K1)和酶-底物络合物抑制常数(Kis)，并加以比较。     

两种不同示踪剂用于蛋白质与抗原分子微阵列信号检测的对比研究

以氧化型琼脂糖凝胶膜为基片，制作蛋白质与抗原分子微阵列，建立了检测固相人IgG,游离IgG和自身抗体分子的免疫学测定模式，分别以辣根过氧化物酶－二氨基联苯胺一双氧水（HRPDAB－H2O2）和胶体金－硝酸银－对苯二酚2种示踪系统作为蛋白质与抗原分子微阵列信号显示剂，并对其作用的原理与特点进行讨论，检测结果发现基于胶体金的免疫金银染色法（IGSS）比固相酶免疫测定法（EIA）敏感，2种示踪系统对固相人IgG的最低检出量分别为0．05ng和0．5ng；而对血清游离IgG的最低检出量IGSS法比EIA法至少高出10倍，两法用于自身抗体的测定亦表现出较好的重复性，在14例HCV感染者中，自身抗体的总体检出率分别为38．6％和31．4％，结果具有显著的同步性，故同时辅以2种示踪剂并用于阵列芯片的联合测试，有助于提高自身抗体的总体检出水平。     

甘薯类胡萝卜素合成酶基因pds全长cDNA的克隆

根据双子叶植物类胡萝卜素合成结构基因氨基酸保守区域设计简并引物,扩增出甘薯编码类胡萝卜素合成关键酶PDS的基因(pds)cDNA中间片断。通过5'-RACE和3'-RACE技术进行cDNA末端的快速扩增,成功地克隆了pds的全长cDNA。序列分析表明,pds基因的全长cDNA序列长度为2128 bp,编码572个氨基酸,与其他植物的序列高度同源。     

苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14. 18.1)是生物黑色索形成的关键酶.该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0 mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100 s延长到140 s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显爪浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50％的抑制剂浓度(IC50)为2.05 mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070 mmol/L.     

桃果实缝合线部位软化相关基因PpPME48的克隆与分析

从实验室已测得的桃突变体缝合线易软的北京2号转录组数据中获得1个与果实软化相关的PME基因。以燕红桃果肉RNA为模板克隆出1条长度为1 113 bp的PME基因,命名为PpPME48(登录号:MT019687)。生物信息学分析表明,PpPME48编码370个氨基酸,蛋白质分子量为41 187.06 ku,包含1个果胶甲酯酶结构域,具有1个较长的N端-PRO区域,属于TypeⅡ型。进化树分析表明,PpPME48蛋白与扁桃、乌梅和甜樱桃的PME蛋白亲缘关系较近。荧光定量PCR结果显示,PpPME48基因在缝合线易软品种燕红中的表达高于不易软化品种晚久保,而且在缝合线处的表达量明显高于果面处。因此,PpPME48基因是一个与缝合线变软密切相关基因。     

重庆市黄葛树过氧化物酶同工酶研究

利用ＰＡＧＥ对重庆市黄葛树的叶柄进行过氧化物酶同工酶分析，初步结果表明，植株枝条伸展性与叶柄过氧化物酶同工酶谱显著相关。根据酶谱特征，作者认为可将黄葛树分为三种类型。     

学龄期健康儿童84名心肌酶谱检测分析

目的用速率法检测兰州市区学龄期健康儿童血清中心肌酶谱:天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、a—羟丁酸脱氢酶(a—HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK—MB),通过检测揭示兰州市区正常学龄期儿童人群血清心肌酶谱的客观状况,并探究不同地域是否存在差异,从而确立此年龄段参考值及其临界范围,以助临床应用。方法对84名学龄期健康儿童周围静脉血采用速率法测定血清中AST、LDH、a—HBDH、CK、CK—MB水平。结果学龄期健康儿童血清中AST、LDH、a—HBDH、CK、CK—MB检测数值均较成人高;男、女间的心肌酶值均无显著差异(P>0.05);与苏州地区同年龄段比较,CK差异有高度显著性(0.002>P>0.001),而CK—MB的差异更为显著(P<0.001)。结论健康学龄期儿童血清中AST、LDH、a—HBDH、CK、CK—MB水平高于成人,在诊断儿童病毒性心肌炎、缺血性心肌病时需参考儿童心肌酶的正常值,因存在地域间差异,应确立符合本地区健康儿童心肌酶的参考范围。