壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶及其性质

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联荆,用吸附交联法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最适条件:1 g用pH为6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5 mL体积分数为1%戊二醛在25℃交联8 h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13 U,4℃吸附6 h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收最高大约为63%,固定化酶的比活为0.082 U/mg.固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA.     

微孔板化学发光酶免疫分析法定量检测肿瘤标志物CA72-4的方法学研究

建立了一种高灵敏、高特异检测人血清中肿瘤标志物CA72-4的微孔板化学发光酶免疫分析法. 采用双抗体夹心反应模式, 以过氧化氢(H₂O₂)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系, 以辣根过氧化物酶作为标记物, 测定简便、快速. 对几种物理化学参数, 如温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间进行了考察和优化. 结果显示方法的线性范围为0～200 U/mL, 相关系数0.9995, 检出限为0.18 U/mL, 批内、批间变异均小于10%. 检测CA72-4的临床低值血清回收率为98.5%, 高值血清回收率为101.3%, 显示了良好的准确性. 与人体血清中常见肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP), 癌胚抗原(CEA), CA24-2, CA19-9, CA15-3无明显交叉. 为了验证该法用于构建临床诊断试剂盒的可行性, 对所用试剂进行了37℃下的7 d热稳定性考察, 各技术指标与4℃放置7 d无明显差异. 对50例临床血样进行了测定, 并与进口酶联诊断试剂盒测值呈良好相关(r² = 0.9383). 这些结果均表明该方法稳定、可靠、实用, 可以满足商品化试剂盒的开发, 在临床CA72-4检测及癌症辅助诊断中具有较高的应用价值.     

花生几丁质酶的纯化及酶学性质研究

本课题利用亲和色谱和凝胶过滤色谱法从花生种子中分离得到了几丁质酶.经SDS-PAGE鉴定,该酶蛋白已达电泳纯,分子量约34.4 kD.在还原和非还原状态下均显示单一区带,表明其为单体蛋白.此外,通过等电聚焦法可测得该酶等电点为5.1.而酶学性质的相关研究则表明：该酶最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

Na+-K+-ATP酶的π-演算语义及验证

给出了Na⁺-K⁺-ATP酶跨越细胞膜同时主动向胞内运转钾离子和向胞外运转钠离子这一生化过程的π-演算模型及该模型的Spin验证. 证明了用过程代数的方法表示以“相互通讯”和“可移动”为主要特征的生物系统并模拟其行为的可行性.      

盐胁迫下拟南芥去乙酰化酶基因的转录组分析

为了探究盐胁迫下拟南芥HD2去乙酰化酶调控的下游基因,本研究以拟南芥野生型WT和四突(hd2q,HD2四个基因的突变体)为材料,采用RNA-seq技术和生物信息学方法,对生长10d的幼苗在高盐(150mmol/LNaCl)处理前和后进行比较转录组分析,并结合实时荧光定量PCR验证转录组数据的可靠性.结果显示:在高盐处理...     

酶体外定向进化(Ⅱ)文库筛选的方法及其应用

定向进化是改造蛋白质分子的一种有效的新策略,但其构建的文库非常大,待筛选的克隆常常多达10^5～10^10．同时在目的酶筛选中,至关重要的是找到高灵敏度、高选择性和高通量的筛选方法．居于此,文中综合评述在突变株分离、酶检测和信号探测等方面,目前的一些常用技术及其最新进展．     

选择性酶解-超滤制备大豆改性蛋白

按一定比例混合脱脂豆粕和反渗透水,混合液在pH8．0及室温下连续搅拌40min,再经离心去渣得到大豆蛋白提取液,将提取液在适当的条件下酶解-超滤,截留液经冷冻干燥得到大豆改性蛋白,所制得产物的蛋白质含量（质量分数）从52．6％提高到78％以上,回收率大于80％,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,经Alcalase 2．4L改性的大豆蛋白主要含glycinin的碱性亚基,经fungal protease concentrate改性的大豆蛋白主要含glycinin的酸性亚基和碱性亚基。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶的工艺研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体,并将其用于固定化L-天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇浓度、交联剂戊二醛浓度、活化剂甲醛浓度、酶溶液浓度等因素对PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶活力的影响。结果表明：在适当的条件下,PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶的活力可达20～40U／g,并且PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶具有良好的生化性质。     

白腐真菌锰过氧化物酶的动力学研究

进行了白腐真菌锰过氧化物酶处理苯胺溶液的动力学研究,导出了酶降解动力学模型。通过测定不同苯胺质量浓度溶液吸光度值,确定苯胺溶液标准曲线,建立苯胺质量浓度与吸光度值的关系方程式。统计分析表明:米氏方程当作模拟模型,应用Lineweaver-Burk法进行数学回归分析,对锰过氧化物酶进行反应动力学研究是可行的。通过数学处理,确定了锰过氧化物酶重要的动力学特征参数:Vm=0.3527mg/L·min,Km=2.7696mg/L。为白腐菌的工业应用提供了重要依据。     

锰纳米酶比色法检测电化学制备过氧化氢

为了拓展纳米酶的应用,采用离子交换和高温热解法将均匀分散的锰原子掺杂到中空碳骨架中制备中空结构的锰纳米酶;提出一种基于锰纳米酶的比色法,用于检测电化学双电子氧还原原位产生的过氧化氢的浓度。结果表明,锰纳米酶具有优异的类过氧化物酶活性,可催化过氧化氢将无色3, 3’, 5, 5’-四甲基联苯胺(TMB)氧化为蓝色氧化态TMB;当过氧化氢浓度为0～6 mmol/L时,体系的吸光度与过氧化氢浓度具有良好的多段线性关系,锰纳米酶比色法具有极低的检出限(0.45μmol/L)和优异的抗干扰性能。