透明质酸发酵条件的初步研究

采用兽瘟链球菌 (Streptococcuszooepidemicus)进行发酵生产透明质酸 (hyaluronicacid ,HA) .摇瓶研究表明 :葡萄糖的补加量和补加方式对HA发酵有着较大的影响 ,采用 4 0g·L- 1的初始葡萄糖浓度及维持培养过程 10g·L- 1的糖浓度 ,可使HA的产量达到 4 .0g·L- 1,分子量在 2 .0× 10 6 Da以上 .     

兽疫链球菌磷脂酰甘油磷酸合成酶基因的分离

根据化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)磷脂酰甘油磷酸合成酶（phosphatidylglycerophosphate synthase, PGPS）基因序列设计引物,通过PCR从兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）基因组中克隆得到开读框为531bp的同源序列pgsa-sz。pgsa-sz的预测编码蛋白含有176个氨基酸残基,分子量19400,等电点8.8,其中含有63个疏水氨基酸,预示其可能的膜结合特性。二级结构预测发现该蛋白含3个跨膜域。此外,该蛋白与S. pyogenes的PGPS具有85％的氨基酸序列相似性。将该蛋白与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的PGPS进行序列比对,发现该蛋白包含PGPS中保守的活性位点区域。上述结果表明,pgsa-sz为S. zooepidemicus细胞膜中PGPS的编码基因。     

发酵法生产透明质酸菌种的选育

用物理方法紫外线、γ射线及辅助磁场筛选、诱变兽疫链球菌,研究获得性状优良、产量相对稳定的透明质酸高产菌种,透明质酸产量可稳定在３～５ｇ／Ｌ。     

离子注入法对链球菌代谢产物透明质酸的影响分析

选用一株ATCC 700400马链球菌亚种,通过离子注入法对链球菌代谢产物透明质酸的影响来找寻透明质酸低耗高产的可能和路径。注入离子选用N+,注入能量分别为15 ke V和20 ke V,范围是0(对照)、(20×1014~100×1014N+/cm2(不同氮离子注入参数以对比)。透明质酸测定选用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)比浊法,通过对比来筛选HA高产型链球菌。结果表明,在注入能量为20 ke V,剂量为20×1014N+/cm2时,产出透明质酸浓度明显高于其他菌株,诱变效果最好,为今后进一步诱变筛选及发酵条件优化奠定了良好的基础。     

透明质酸产生菌的化学诱变及发酵条件探索

以兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）C55151为原始菌种, 经N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（NTG）诱变处理, 获得一株高产透明质酸（Hyaluroni c acid, HA）的变异株J18, 其HA产量较原始株提高一倍. 利用正交设计试验探索出该变异株的最佳发酵培养基配比为葡萄糖50 g/L, 酵母膏30 g/L, 硫酸镁0.5 g/L.　发现添加十二烷基硫酸钠（SDS）能够大幅度提高HA产量． 同时对原始株、 变异株的发酵过程进行了研究, 发现变异株J18在发酵的任何时间, 其HA产量都高于原始菌种, 且菌体浓度与发酵液中的葡萄糖浓度及pH值呈负相关性.     

利用16S-23S rDNA间隔区快速鉴定猪链球菌和马链球菌兽疫亚种

利用16S-23S rDNA间隔区(ISR)长度和序列的多态性,结合16S rDNA和23S rDNA的保守性,分别在16S rDNA末端和23S rDNA前端保守区设计上下游引物,进行PCR扩增.结果为21株猪链球菌均扩增出长度约为1200bp的片段,8株马链球菌兽疫亚种均扩出约1300 bp的片段,其他属菌株和阴性...     

原生质体诱变选育透明质酸菌株及发酵条件的优化

采用N 甲基 N′ 硝基 N 亚硝基胍(NTG)诱变原生质体,选育了一株产透明质酸的兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)H 35.并经过发酵条件的优化,确定了溶菌酶作用的最佳条件是0.6mg/mL溶菌酶高渗溶液,30℃水浴下酶解20min;H 35的最佳发酵条件是葡萄糖4.0%、酵母膏2.0%、NaCl0.2%、KH2PO40.2%、MgSO4·7H2O0.06%、初始pH7.0、35℃,200r/min、培养18h.发酵液中透明质酸的含量从最初的0.47g/L提高到优化后的1.43g/L.     

一株产生透明质酸的菌株的筛选

从牛鼻粘膜中分离出一株产生透明质酸的细菌,经鉴定为兽疫链球菌（Streptococcus zooepidemicus）,在葡萄糖为碳源的摇瓶发酵中产量为3．1g/L,具有微生物发酵法生产透明质酸的潜力。     

透明质酸发酵流加过程的研究

研究了透明质酸发酵的流加过程,对碳源的简单分批流加、指数流加、前中期指数流加+后期控制糖浓度的流加以及前期指数流加+中期控制糖浓度的流加这四种不同流加方式进行了探讨,得到最佳流加方式,透明质酸发酵水平稳定在4g/L以上。