用复性电泳技术研究溶酶体蛋白水解酶的性质和活性

介绍了复性单向电泳（Ｇ－ＰＡＧＥ）和复性双向电泳（ＩＥＦ－Ｇ－ＰＡＧＥ）的概念、原理、方法、应用范围、优缺点和使用该方法应注意的事项。并用该方法定性和定量分析了Ｃ６大白鼠神经胶质瘤细胞酸性溶酶体蛋白水解酶的性质和活性。     

猪肾氨基酰化酶Ⅰ的初步晶体学研究

<正>氨基酰化酶Ⅰ(aminoacylase I,ACY-1)(3.5.1.14)主要存在于哺乳动物的肾脏和微生物中,是生物体进行氨基酸代谢时一个重要的水解酶,它可逆地催化酰化L-氨基酸的水解反应.该酶由772个氨基酸组成,分子量为85.500ku,是一个寡聚酶,由两个相同亚基组成,每个亚基含有一个锌离子.猪肾ACY-1与人的ACY-1的核酸序列有88.3%的同源性,氨基酸序列的同源性为87.7%.将猪肾ACY-1的氨基酸序列放在PROSITE数据库中检索,除了几个潜在的蛋白激酶磷酸化的位点和2个可能的N-糖基化位点外,没有其他明显的特征.把猪肾ACY-1的核酸序列和氨基酸序列与EMBL/GenBank和SwissProt Database中的序列进行比较,除了由E.coli表达的酰氨酶(amidase,succinyl-diaminopimelate desuccinylase),没有发现它与其他蛋白质有同源性,Wilbur-Lipman Algorithm统计分析表明,酰氨酶与猪肾ACY-1序列在400个氨基酸长度内有24%的等同性、这些结果提示,ACY-1是一类新的含锌金属蛋白.张艳等人用CD和FTIR谱对它的二级结构进行了研究.     

酶反应偶联离子色谱法检测甲胺磷农药

有机磷农药的检测一直是人们感兴趣的研究课题.本文介绍了应用酶反应偶联离子色谱法测定甲胺磷农药.该方法基本原理是:植物水解酶促进乙酸萘酯分解生成乙酸.甲胺磷农药抑制植物水解酶的活性,植物水解酶的活性随甲胺磷浓度增加而降低,乙酸萘酯分解生成的乙酸也减少,离子色谱能够快速灵敏准确的检测生成的乙酸的减少量,由生成的乙酸的减少量定量甲胺磷农药.应用本方法,测定了甲胺磷农药,线性范围在0.24～120μg/mL,相对标准偏差(RSD%)=5.3%,测定结果准确灵敏.     

溶菌酶在食品中的应用

溶菌酶(Lysozyme)，又称胞壁质酶，是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，因其有溶菌作用，故命名为溶菌酶。溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，化学性质非常稳定。由于细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性这种作用，因而在食品领域获得了广泛的应用。     

柔嫩艾美耳球虫感染对雏鸡肾脏病理损伤的探讨

14日龄海兰褐雏鸡80只,分为对照组和感染组。感染组每只鸡口服接种8.0×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,分别于接种后第0,3,6,9,12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,测定血清尿酸和肌酐含量,同时取感染后第6天鸡的肾脏,观察其病理组织学变化。结果表明:感染组鸡的血清尿酸含量于感染后第3,6,9天显著升高了267.41%(p<0.01),81.41%(p<0.01)和52.09%(p<0.05),肌酐含量在感染后第3,6天也显著增加了63.61%(p<0.05)和81.80%(p<0.05);肾脏的实质细胞呈轻度的颗粒变性或水泡变性。提示:球虫感染导致雏鸡肾脏病理损伤。     

过度训练对大鼠机体及肾功能的影响

研究了过度训练对大鼠机体及肾功能的影响.采用BECKMAN 自动生化分析仪、紫外可见分光光度计、MA- 4210 型全尿微量自动分析仪以及放射免疫测定技术,对游泳过度训练的SD大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血浆尿酸(PTr)、血浆尿素氮(BNU)含量及血浆肾素(PRA)活性和尿蛋白(Upro)含量等进行了测试分析.结果表明,过度训练可导致血、尿上述指标显著升高,尿pH值显著降低,提示过度训练会导致机体及肾功能发生疲劳性过度损伤.     

水体及沉积物中碱性磷酸酶的研究进展

阐明了碱性磷酸酶在水体和沉积物生态系统中的作用，重点综述我国海湾和淡水湖泊水体及沉积物中碱性磷酸酶的研究状况。     

一次性运动负荷练习对人体尿中羟脯氨酸排泄规律的影响

测定男性运动员安静状态和一次性负荷练习后24 h内尿羟脯氨酸(Hyp)的排泄情况,分析结果表明,安静状态下人体尿Hyp的排出量24 h内比较均匀,其同尿Hyp/Cr比值与24 h总尿Hyp的排量相关性较高的时间段是20:00~23:00时段,一次高负荷练习后没有改变各时段的尿Hyp排出量和24 h尿Hyp排出总量.     

有机磷水解酶的大肠杆菌细胞表面展示

PCR扩增来自黄杆菌ATCC27551的有机磷水解酶基因opd,直接与XcmⅠ酶切去除Ampr基因片段的pZXL-T连接,将opd克隆于锚定单元Lpp-OmpA编码序列下游,转化E.coliBL21(DE3).经抗性筛选、PCR鉴定和测序证实,成功构建了具有全细胞催化效应的大肠杆菌细胞表面展示工程菌.SDS-PAGE结果表明,工程菌能表达产生51 kD的融合蛋白.细胞表面展示的有机磷水解酶具有较高全细胞酶活性,用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低90%.     

USP22通过AKT磷酸化途径影响肝癌细胞增殖

利用RNA干扰技术研究USP22沉默对肝癌细胞系增殖的影响及其可能的分子机制。本研究采用USP22小干扰RNA技术,对体外培养的USP22阳性肝癌细胞株HepG-2及SMMC-7721细胞株进行si RNA转染,用qRTPCR及Western blot技术分析胞内USP22、AKT、p-AKT表达水平,并利用CCK8检测细胞增殖能力。结果发现:USP22-siRNA转染24h及48h后,两株肝癌细胞株胞内USP22水平明显降低,AKT磷酸化水平明显降低。CCK8结果显示,USP22沉默和显著抑制肝癌细胞增殖能力。结果提示:对USP22的沉默可显著抑制AKT的磷酸化,USP22可能通过AKT的磷酸化途径促进肝癌细胞增殖。USP22可能是肝癌患者预后的重要靶点。