免疫共沉淀结合质谱分析筛选HMGB4相互作用蛋白

为揭示HMGB4在精子发生过程中所起的作用,采用免疫共沉淀技术富集NTera-2细胞中的HMGB4 结合蛋白.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取HMGB4结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST).通过搜索数据库在NTera-2细胞系中鉴定到5个HMGB4相互作用蛋白,分别是Pdhal、Keratin 6B、Keratin 5、Actb Actin cytoplasmic 1、RPL18.为进一步研究HMGB4在精子发生机制中的生理功能提供了基础.     

考马斯亮蓝法快速测定乳品中蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染料染色法对市售乳品中蛋白质进行测定,在595 nm波长处测定溶液的吸光度。实验结果表明,标准蛋白质在10～80 μg/mL之间呈现良好的线性关系。该法简便快速、灵敏度高、重现性好,是测定乳品中蛋白质的有效方法。     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

锯缘青蟹可溶性蛋白与可溶性糖的季节变化

锯缘青蟹(Scylla serrata)是生活在河口海区的一种经济甲壳动物,环境温度对其生化组成具有重要影响,而其环境温度是随季节变化而不断变化.本研究采用生物化学方法对锯缘青蟹鳃、肝胰腺和肌肉等3种器官组织中可溶性蛋白和可溶性糖含量的季节变化进行研究.结果显示锯缘青蟹3种不同器官、组织中可溶性蛋白含量,均是夏季最低,冬季最高,春秋季介于2者之间.3者的变化趋势一致,春季后降低,夏季降至最低,然后秋季和冬季依次升高.3种不同器官、组织中可溶性糖含量均是春季最高,夏季最低,秋冬季介于2者之间.其变化趋势是春季后降低,夏季降至最低,然后秋季和冬季升高(肝胰腺)或依次升高(鳃和肌肉).本实验结论为锯缘青蟹鳃、肝胰腺和肌肉中可溶性蛋白的季节变化基本一致;不同器官组织中可溶性糖的季节变化也较为一致.但可溶性蛋白和可溶性糖之间的季节变化有差异,说明不同器官组织中同一生化成分的季节变化较为相似;不同生化成分的变化规律各异.     

纳米材料改善蛋白质毛细管电泳分离的研究

报道了SiO2纳米材料作为添加剂用于毛细管电泳分离蛋白质的研究,考察了缓冲溶液中添加聚环氧乙烷和SiO2纳米材料对分离的影响.聚环氧乙烷和纳米材料的质量浓度比明显影响蛋白质的分离,30 mmol.L-1磷酸溶液中加入0.2 g.L-1SiO2纳米材料和2 g.L-1聚环氧乙烷不仅不能改善分离,而且使分离效率降低(α-乳白蛋白和牛血清白蛋白的峰重叠,分离度为0);但加入0.5 g.L-1SiO2纳米材料和0.5 g.L-1聚环氧乙烷的缓冲溶液则可以明显改善α-乳白蛋白和牛血清白蛋白的分离度,并且在12.5 min内就可以完成5种蛋白质的分离.实验结果表明,纳米材料是分离蛋白质的有效添加剂.     

肌动蛋白的聚合动力学研究进展

肌动蛋白的聚合和解聚动力学过程与其功能的行使有密不可分的关系:肌动蛋白如要在细胞内行使其功能就一定涉及到其聚合动力学过程.肌动蛋白的聚合过程可分为4个步骤:肌动蛋白单体的活化;肌动蛋白单体聚合成核;肌动蛋白纤维生长的过程;聚合达到动态平衡,肌动蛋白纤维不再生长.一些影响肌动蛋白聚合过程的因素,比如,核酸和肌动蛋白相关蛋白也在文中做了讨论.其目的在于更深入地了解生物大分子如何组装成更复杂的体系以及这些体系在细胞中怎么行使功能.     

两种质粒编码的Borrelia burgdorfei寡肽结合蛋白(OppA)的表达和纯化

为了弄清Borrelia burgdorferi中OppA4和OppA5蛋白的生物学功能,oppAIV和oppAV基因分别被克隆并在大肠杆菌中表达．大肠杆菌BL21CodonPlus（DE3）-RIL被用来克服由A＋T丰富引起的密码偏差,十二烷基-β—D-麦芽糖苷和甘油分别用于提高脂蛋白的分离效果和维护蛋白的稳定性．经过金属离子亲和层析,OppA4和OppA5纯蛋白产量可达到1mg／L细胞以上．     

蝗虫嗅觉相关蛋白及其功能研究进展

嗅觉在昆虫生命活动中起着重要的作用，气味结合蛋白（Odorant Binding Proteins，OBPs）和化学感受蛋白（Chemosensory Proteins，CSPs）在昆虫的嗅觉系统中发挥重要作用。近年来随着基因组学和转录组学的快速发展，蝗虫OBP和CSP基因陆续被鉴定出来，部分OBP基因的功能也逐步被证实。本文针对蝗虫OBPs和CSPs的种类、结构特征、表达分布、三维结构以及生理功能等方面进行概述，为更多昆虫OBP基因的鉴定及其功能研究提供参考，也为进一步揭示昆虫-环境间的化学通讯机理以及开辟新的害虫防治策略奠定基础。     

水稻MRG701互作蛋白的筛选和鉴定

水稻MRG蛋白MRG702作为组蛋白H3K4/H3K36甲基化的识别蛋白,影响了水稻油菜素内酯BR通路和开花过程中特异的基因表达.MRG蛋白家族的另外一个成员MRG701在序列上与MRG702高度同源,它们的共同缺失突变体表现出矮小、直立、晚花等多种表型.以MRG701为饵,筛选了水稻全长均一化酵母文库,得到了26个可能与MRG701结合的蛋白质,通过定位分析,这些蛋白主要定位于细胞核和线粒体中,在二者中的分布比例分别为46.2%和23.1%.通过酵母双杂交实验和双分子免疫荧光实验,对全部得到的26个蛋白和其中4个蛋白与MRG701蛋白的相互作用进行了验证,发现Os10g0410600,Os05g0215800,Os04g0687100和MRG701在烟草中存在相互作用,为进一步研究甲基化识别蛋白的作用机制及作用网络提供了基础.     

转基因植物生物反应器的研究

综述了利用转基因植物作为生物反应器生产外源蛋白质,包括抗体、疫苗、药用蛋白等的优势及研究进展,并对转基因植物生物反应器生产蛋白类药物存在的问题及相关对策进行了论述。