盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻,可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油,在甘油代谢途径中,3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶,且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布,我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心,获得盐生杜氏藻的完整叶绿体,用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

用β-环糊精衍生物构筑乳酸脱氢酶

用β-环糊精和马来酸酐合成双（6-氧-丁烯二酸单酯）-β-环糊精（简称为化合物1），以化合物1与Fe^3 形成的配合物模拟乳酸脱氢酶催化乳酸的脱氢，用过氧化氢作为质子受体，生成的丙酮酸用2，4-二硝基苯肼检测，结果表明：化合物1与Fe^3 形成的配合物可以催化乳酸的脱氢反应。     

枯草杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

采用DEAE—Sephaurose离子交换层析，Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术，对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化，纯化倍数为112．3倍，比活为1．46U／mg，回收率为8．2％，纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带，测得全酶相对分子质量为107kD，具有两个分子量相同的亚基，亚基相对分子质量为51kD，最适pH值为8．0，最适温度为30℃，对热不稳定，以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物，其Km值分别为Km1(NADP^ )=19．8μmol／L和Km2(6-GPA)=22．6μmol／L，在5mmol／L～50mmol／L浓度范围内，Mg^ ，Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用，Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用，K^ ，Na^ ，Cl^-，NO^-3，SO^-4对酶几乎没有影响，用PMSF，TNBS，NBS，DTT和BrAc对酶进行修饰，实验结果表明，丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。     

利用乙醇脱氢酶基因证据揭示稻属CCDD异源四倍体中染色体组的起源

对稻属异源四倍体中染色体组C和D以及稻属现存的所有二倍体染色体组A、B、C、E、F的乙醇脱氢酶基因（Adh1）片段分别进行PCR扩增、克隆和序列测定,并以G染色体组序列作为外类群,采用PAUP运算软件中的简约性方法对所测定的序列进行了系统发育分析．结果表明：（1）3个CCDD四倍体是同一次杂交事件的产物;（2）四倍体中的C染色体组和亚洲二倍体中的C染色体组表现出更近的系统发育关系;（3）D染色体组和E染色体组表现出较近的亲缘关系,二者可能有共同的祖先．     

大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类，为了进一步研究其功能，我们以大肠杆菌DH5α菌株基因组DNA为模板和相应的寡聚脱氧核苷酸为引物，进行PCR扩增大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因(NADP-specific glutamate dehydrogenase，gdhA gene)，将所得DNA片断连接到质粒pUC18上，转化大肠杆菌DH5α，进行蓝白筛选和酶切鉴定，经测序证明序列正确无误后将gdhA基因连接到表达载体pTrcHisC上，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，经SDS-PAGE和双波长扫描分析，确定大肠杆菌谷氨酸脱氢酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在，未能检测到可溶性蛋白的表达，表达量可达菌体总蛋白的15％以上．     

濒危植物多辐溲疏柠檬酸脱氢酶同工酶分化的数量分析

运用电泳分析技术研究了特产四川省南川县金佛山处于濒危状态的多辐溲疏不同生境的５个小居群的５个个体叶片柠檬酸脱氢酶同工酶，并对谱带位置进行编码然后采用Ｒｏｇｅｒｓ－Ｔａｎｉｍｏｔｏ、Ｋｕｌｅｚｙｎｓｋｉ、Ｃｚｅｋａｎｏｗｓｋｉ及Ｊａｃｃａｒｄ结合系数上的ＵＰＧＭＡＴ和ＷＰＧＭＡ法对其个体及居群水平酶谱带位置上的变异式样进行了聚类分析，结果表明，不论是在个体水平或是代表该种的谱带作为分类标准是极其主观     

普通生酮基古龙酸菌S2基因文库的构建和筛选

在Vc生产的第2步发酵中,普通生酮基古龙酸菌S2能利用醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为Vc的前体2-酮基-L-古龙酸(2-KLG).对普通生酮基古龙酸菌S2基因组DNA进行部分酶切,与黏粒载体pKC505连接后,用包装蛋白进行包装,转染大肠杆菌DH5α,构建成普通生酮基古龙酸菌S2基因组文库,得到12 000余个转化子.再利用纯化的醇醛脱氢酶免疫家兔制备出合格抗血清,应用免疫酶斑点技术(Dot-ELISA)对文库进行筛选,获得1个阳性克隆K719#.通过检测此基因工程菌的活性,表明在添加辅酶PQQ后,K719#具有使L-山梨糖转化为2-KLG的功能,从而使醇醛脱氢酶在大肠杆菌中得到了表达,这为简化Vc的生产工艺奠定了基础.