B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134—285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体。测序表明除(ATA^263→ATG^263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外,其余序列与Genbank报道的序列一致。蛋白表达用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS—PAGE表明：在33ku处有明显的融合蛋白表达,其表达水平高达总茵体蛋白的50％。点印迹证实融合蛋白能与anti—His6Tag抗体反应。生物学活性研究表明BLys协同丝裂霉素能明显地抑制HeLa细胞的生长。     

鲤NADH泛醌氧化还原酶亚基3基因的克隆及低温适应相关性分析

根据鲤低温下特异表达的基因（片段）序列设计引物,采用2轮菌落PCR方法对鲤脑全长cDNA文库中的克隆进行筛选,确定了基因序列152在文库中的位置,经生物信息学比对分析确定其为NADH泛醌氧化还原酶亚基3基因.这一基因在低温下的特异表达,对于低温下鱼类机体的供能,起着重要作用.结果还表明,NADH泛醌氧化还原酶亚基3基因在鲤氧化呼吸链电子传递系统中与低温适应性状在一定程度上存在相关性.     

Cloning of a novel gene associated with human nasopharyngeal carcinoma

One EST N27741 with high expression in normal adult nasopharynx tissues but low expression in adult poorly differentiated squamous nasopharyngeal carcinoma has been selected out by the high-density cDNA array expression profiling technique. The differential expression has been confirmed by RT-PCR. One novel gene of 1096 bp has been cloned based on this EST. Bioinformatics analysis found that the new gene sequence contains a whole reading frame encoding 256 amino acids. There is a stop codon TAA in front of the 5′ end start codon, and a tailing signal AATAAA and poly A tail at the 3′ end. There is no homologous known gene found after searching by blasting this sequence to non-redundancy nucleotide database. Therefore it is considered a novel gene related to nasopharyngeal carcinoma.     

光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶小亚基基因的克隆

光合细菌Ｃ．ｖｉｎｏｓｕｍ可溶性氢酶由５２ｋＤａ和２１．５ｋＤａ两个亚基组成。该酶大亚基Ｎ－末端氨基酸序列为：ＳＲＴＩＴＩＥＰＶＴＲＸＥＧＨＡＲ,小亚基Ｎ末端氨基酸序列为：ＳＴＱＰＫＩＴＶＡＴＸＬＤＧ。根据大、小亚基Ｎ－末端氨基酸序列设计两套引物,Ｐｒｉｍｅｒ１：５’ｇＡＴ（ｇＴｇＡＴ（ｇ／Ｃ）ｇＴｇＡＴ（ｇ／Ｃ）ｇＴ（ｇ／Ａ）Ｃｇ３’和Ｐｒｉｍｅｒ２：５’ＡｇＣ ＡＣ（Ｃ／ｇ）ＣＡｇＣＣ（Ｃ／ｇ     

日本脑炎病毒(JEV)内蒙古分离株M73-1E基因的5′端克隆及部分序列分析

根据国外报道的 JEV( Japanese encephalitis virus)基因组全序列 ,针对 JEV E基因 5′端设计合成一对特异引物 ,以日本脑炎病毒内蒙古分离株 M73-1 RNA为模板 ,经 RT-PCR扩增 ,获得 366bp的 JEV E基因 c DNA片段 .将此片段重组于质粒 p UC1 9中 ,并转化大肠杆菌DH5α.经 PCR扩增 ,酶切及序列分析 ,结果表明 JEV M73-1 5′端 1 2 6个核苷酸序列与 JEV日本 Nakayama株和 Ja OAr S982株的同源性分别为 96.8%和 96.8% ,氨基酸序列同源性均为 99.2 % .通过对病毒基因组结构分析从分子水平上进一步证实了 1 973年在呼和浩特市流行的脑炎是由 JEV引起的流乙脑炎 .E基因编码 JEV的囊膜糖蛋白 ,是其重要表面抗原 .JEV M73-1 E基因 5′端克隆和部分序列分析对 JEV的分子生物学研究、建立分子生物学诊断技术以及基因工程疫苗的研制均具有重要学术意义和实际价值     

含有重组人白细胞介素18基因的工程菌的产物表达和鉴定

0引言 1996年,Ushio等[1]从人的肝脏细胞中克隆了人的白细胞介素18(IL-18) cDNA,并在大肠杆菌中得到了表达.IL-18是国际上最新获得的细胞因子[2].     

一种优化的mRNA差异显示技术分析白刺盐碱胁迫表达相关基因研究

mRNA差别显示PCR技术是分离、检测差异基因表达的有力工具 我们研究了存在的可能影响DDRT-PCR研究结果的因素 通过改变DDRT-PCR方法中的引物、PCR反应中的退火温度等条件,得到了一种优化的DDRT-PCR技术,运用该项技术研究了白刺盐碱胁迫相关基因的差异表达 结果发现,运用这种方法得到的差异表达基因片段假阳性率较低,且差别条带较长,多为800bp以上,克服了DDRT-PCR技术中的主要问题,为更广泛地运用该项技术奠定了基础