RACE的研究及其在植物基因克隆上的应用

cDNA的末端快速扩增（RACE）是获得全长cDNA的有效手段之一。综述了RACE技术的原理，局限性、方法改进和新型RACE技术以及RACE在植物基因克隆上的相对优势，应用现状和未来的发展前景。     

土壤细菌基因资源的直接分离——16S核糖体RNA基因模式

细菌遗传资源的开发利用必须先分离纯培养物,但绝大多数环境细菌无法人工培养。由于基因工程技术能直接利用基因元件,为绕过人工培养的困难,我们以细菌１６Ｓ核糖体ＲＮＡ基因为模式,建立了直接从土壤中分离基因元件的方法,该方法包括直接从土壤中分离ＤＮＡ,ＰＣＲ扩增基因和ＰＣＲ产物克隆等步骤,为直接收集,利用土壤细菌遗传资源奠定了基础。     

肝细胞癌特异抗原的筛选

应用重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术,从广西肝细胞癌中初步筛选出９个基因克隆,与肝癌患者及其他人血清的反应证明对肝癌有特异性。ＤＮＡ测序结果与基因库核对,发现其中７个有同源结构;２个为无同源结构的新分子。     

马铃薯卷叶病毒中国分离株外壳蛋白基因及其上游先导序列的cDNA克隆和序列分析

按照马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）核苷酸序列，针对ＣＰ基因及其上游基因间隔区全长约０．８ｋｂ的区段设计合成两个特异性引物，以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板，反转录合成ＣＤＮＡ第一条链，再经ＰＣＲ扩增合成ｃＤＮＡ，将ＣＤＮＡ克隆于ｐＵＣ１９质粒．限制性酶切分析和核苷酸序列测定表明克隆的ＰＬＲＶ－Ｃｈ外壳蛋白（ＣＰ）基因及其上游基因间隔区的全长ＣＤＮＡ共８２４个核苷酸，与国外报道的４个ＰＬＲＶ分离株的核苷梳序列相比具有高度同源性．ＰＬＲＶ的外壳蛋白基因序列与其上游基因间隔区相比保守性更强．     

内江猪、伍隍猪遗传标记基因及遗传关系的研究

对内江猪和伍隍猪的染色体C—带核型和Ag—NOR、6种血清蛋白(酶)(Tf、Po、Hp、Akp、Es和Am)多态性和2种血清酶(AKP和LDH)活力进行了研究,并以荣昌猪和杜洛克作对照进行聚类分析。结果表明:内江猪与伍隍猪染色体C—带核型一致。两类群之间Ag—NOR的众数,每个细胞的平均数及8、10号染色体频率均无显著差异(P>0.05);血液蛋白的基因频率除AKP外,其余差异均不显著;以五个基因座的基因频率(Tf、Po、Hp、8Ag—NOR和10Ag—NOR)计算的标准遗传距离聚类,内江猪与伍隍猪首先聚为一类,然后与荣昌猪相聚,与杜洛克相距很远,自成一类。并结合伍隍猪的形成历史、体形外貌、生产性能等综合考查,表明伍隍猪与内江猪的亲缘关系十分密切。     

黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。     

杂交水稻三个基因位点的遗传研究

研究了野败型杂交稻（Oryza SativaL.)两个籼稻（Indica)组成三对性状的遗传特性及其基因位点间的相互关系。本研究中酯酶同工酶E12A的存在对缺如，芽鞘的紫色对绿色和柱头的紫色对绿色分别是显性。三对性状分别受三个基因位点的三对等位基因控制，表现出典型的孟德尔遗传特征。三个基因位点间存在着明显的连锁关系，其排列顺序是紫色芽鞘基因位点（Pc)－紫色柱头基因点（Ps)－酯酶同工酶基因位点03（Est－3）。     

林木原生质体培养研究进展

本文概述了近年来林木原生质体培养的研究进展，郑重论述了不同树种和基因型、培养基、培养方法以及激素种类、浓度和配比对林木原生质体生长的影响，并针对林木原生质体培养中所存在的问题进行了较详细的讨论。     

贵州苗族布依族汉族PTC尝味能力的调查

用阈值法对贵州长顺县的苗族、布依族、汉族的苯硫脲（ＰＴＣ）尝味能力进行了调查，共检测了２０４７人。结果表明：不同民族ＰＴＣ尝味阈值的差异高度显著（Ｐ＜０．０１），不同民族间的味盲率亦有显著性的差异（Ｐ＜０．０５）。三个民族总计中，男女尝味阈值的差异高度显著（Ｐ＜０．０１），味盲率呈显著性差异（Ｐ＜０．０５）；苗族、布依族和汉族中，男女尝味阈值均有高度显著性差异（Ｐ＜０．０１），苗族、布依族的男女性别的味盲率间均无显著性差异（Ｐ＞０．０５），汉族的男女味盲率间差异显著（Ｐ＜０．０５）．三个民族中，味盲基因（ｔ）频率以汉族为最高（ｔ＝０．２２４２）。     

转基因鱼研究概况

基因转移的研究为鱼类遗传育种开辟了一条新的途径。目前已有十多个国家对十几种鱼类进行了这一研究。本文介绍了基因转移的方法和转基因鱼的研究进展。目前，显微注射和电穿孔仍是有效的转移外源基因的方法。外源基因的构建则向“全鱼基因”方向发展，使用鱼类自身的启动子和结构基因。生长激素基因和抗冻蛋自基因的转移是现阶段研究的重点。本文还提出了转基因鱼研究中必须加以解决的一些问题。