基于纳米材料的CpG核酸药物载运系统

人工合成的含有胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸的脱氧寡核苷酸(CpG ODN)可以模拟细菌DNA的免疫激活作用,被哺乳动物免疫系统视为"危险"信号而引发机体产生免疫应答.因此,CpG ODN可以作为潜在的治疗性DNA和免疫佐剂,在感染性疾病、过敏性疾病和癌症的辅助治疗中发挥作用.然而,未经修饰的CpG ODN通常易被核酸酶降解,细胞摄取率低,需要较高的给药剂量和反复给药,这些缺陷严重地限制了CpG的应用.近年来,纳米技术的发展为解决核酸药物的递送问题提供了新的工具.已有大量研究报道显示,纳米材料负载的CpG核酸药物表现出高活性、低毒性、生物相容性好等特点,有望作为新型免疫治疗制剂应用于相关疾病的预防和治疗中.本文对CpG核酸药物的发展背景进行了简述,介绍了CpG药物的作用机制、CpG载运对载体材料提出的要求,重点对近年来兴起的多种基于新型纳米材料(包括纳米脂质体/共聚物、各种无机纳米材料和DNA纳米结构等)的CpG载运体系进行了评述,总结了各种载运系统的原理和特点,并对纳米材料递送CpG药物的发展趋势进行了展望.     

光谱法研究PBBHAMF与小牛胸腺DNA的相互作用

以小牛胸腺DNA为研究对象,探讨了4’-苯基-3-溴-8-[N,N-二(2-羟基乙基)氨基甲基]黄酮(PB-BHAMF)与小牛胸腺DNA之间的相互作用模式.在以吖啶橙(AO)为荧光探针的实验中,DNA-AO复合物的荧光被PBBHAMF猝灭,其猝灭过程主要为静态猝灭;DNA的存在使PBBHAMF的紫外光谱发生了减色效应,DNA的粘度增大,CD光谱274 nm处信号发生变化,这些都能判断PBBHAMF与DNA发生了嵌插结合.此外,红外光谱结果表明PBBHAMF与DNA还存在静电结合.     

DNA与CdS-COOH-EcoRI复合物相互作用的研究

采用荧光光谱、原子力显微镜、琼脂糖凝胶电泳等技术探究CdS-COOH-EcoRI复合物与DNA的相互作用.研究发现,小粒径的CdS-COOH-EcoRI复合物与DNA除了有特异性结合,还发生非特异性结合.DNA相对浓度比较大以及恒温孵育时间较短时,以特异性结合为主;而随着DNA相对浓度的减小以及恒温孵育时间的延长,会伴有非特异性结合.Ca2+存在时,可以通过延长孵育时间“激活”酶切反应,使得DNA被剪切.因此可以通过改变DNA相对浓度和孵育时间来调控EcoRI对DNA的剪切.     

Pichia酵母宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

为检测重组人血白蛋白中外源性DNA残留量,以宿主酵母工程菌基因组DNA为模板,使用地高辛标记探针进行点杂交.结果证明:该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作安全简便,可用于重组人血白蛋白的检测.     

皂荚素对大鼠DNA损伤的干预及对血清胆固醇的影响

为了探究皂荚素对高胆固醇模型大鼠抗氧化能力和DNA损伤以及对大鼠血浆胆固醇及相关血脂生化指标的影响,将48只健康大鼠,随机分为对照组、低浓度皂荚素组和高浓度皂荚素组,各组分别喂饲皂荚素质量比分别为0,80,200 mg/kg的饲料,制作由不同浓度H₂O₂(0,6,12,18 μmol/L)诱导的DNA损伤兼高胆固醇大鼠模型.实验期限为60 d,实验结束采血,应用试剂盒检测血清丙二醛(MDA)水平和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,并采用单细胞凝胶电泳法测定淋巴细胞DNA的损伤情况.结果显示,与对照组比较,低浓度皂荚素组、高浓度皂荚素组MDA含量和血清GSH活性差异均具有统计学意义;低浓度皂荚素组和高浓度皂荚素组大鼠血清总胆固醇TC、甘油三酯(TG)、载脂蛋白B(apoB)的含量都有明显的降低,尤其以高浓度皂荚素组最为显著;两组大鼠的胆汁酸排泄量增加,载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平影响差异无统计学意义.说明皂荚素可有效降低血浆胆固醇水平,对于健康幼年大鼠血清GSH及脂质过氧化产物MDA含量有显著影响,对H₂O₂诱导的DNA损伤也表现出明显的保护作用.     

柳杉无性系指纹图谱的构建及遗传多样性分析

【目的】为了构建柳杉无性系的DNA指纹图谱,准确区分柳杉无性系。【方法】利用SSR标记分析了柳杉89个无性系的遗传多样性和指纹图谱。【结果】11对引物共检测出53个等位点,平均每个SSR位点有5个,变化范围为3～6个; 有效等位基因数(N_e)变化范围为1.887 0～4.295 6,平均为3.041 1; Shannon信息指数(I)变化范围为0.774 9～1.556 3,平均为1.208 1。表明SSR标记具有较高的多态性。根据SSR标记特点及引物的顺序,将SSR引物扩增统计的“0”、“1”转换成基因型,通过不同基因型组合,构建了柳杉89个无性系的 DNA 分子指纹图谱,使每个无性系都获得了 1 个 22 位数的指纹图谱号码,同时基于个体间的遗传距离将柳杉89个无性系分为 5 类。【结论】SSR标记适用于柳杉无性系遗传多样性分析及鉴定,柳杉的遗传多态性处于中等偏高水平。     

阿柔比星降低米托蒽醌引起的细胞死亡的机制

为了研究阿柔比星(Aclarubicin,简称ACL)和米托蒽醌(Mitoxantrone,简称MTX)联合作用的效果,采用细胞存活率试剂盒和Annexin V/PI双染检测两种药物对L929细胞存活率的影响,结果显示,ACL能降低MTX引起的细胞死亡.体内酶复合物检测结果显示,MTX显著地促进了拓扑异构酶2(TOP2)-DNA复合物形成,而ACL可以极大程度地降低该复合物的水平.Western-blotting结果表明,相比于MTX处理组细胞,ACL和MTX联用能够显著降低γH2AX蛋白的形成,说明ACL能降低MTX造成的DNA损伤.由此表明,ACL是通过阻止TOP2-DNA复合物的形成来降低MTX引起的细胞死亡,并暗示了联合使用时ACL可能会对MTX有拮抗作用.     

Comparative Studies on Preparation of Large Plant DNA Fragments by Pulse Field Gel Electrophoresis

The preparation of large plant DNA fragments is extremely important to the construction of large insert DNA libraries (YAC, BAC, PAC and TAC). Although several techniques have been developed in each step of large plant DNA fragments preparation, the whole processing remains complicated and difficult. Based on authors‘ research experience and the recent worldwide development in this field, the following aspects are discussed in this paper: techniques of plant high molecular weight (HMW) DNA purification by pre-electrophoresis, the optimal conditions for the partial digestion of the HMW DNA by HindⅢ, the isolation effects of of large plant DNA fragments (100-400 kb) with different parameters of pulse field gel electrophoresis (PFGE), and the recovery of large DNA fragments. Through comparative studies, the advantages and disadvantages of each technique are discussed and some recommendations are proposed for preparing high quality large plant DNA fragments. The suggested techniques have been used in preparing the large DNA fragments of maize, rice, moss, laver, sea tangle and peach, and similar resuits are obtained among all the materials. This paper only reports the results using maize as material.     

双核钌配合物的DNA键合及光断裂性能

合成了1个新型的双核钌配合物,并通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱滴定、热熔链、盐效应、黏度和凝胶电泳实验研究了其与小牛胸腺DNA(ct-DNA)之间的相互作用. 结果表明,由于主配体的位阻作用,该配合物通过部分插入模式与DNA键合,键合常数大于10⁶ L/mol;在365 nm紫外光照射下,该配合物能够断裂pBR322 DNA,是有效的DNA断裂试剂.