血小板生成素Ⅱ体内生物活性研究

目的：探讨血小板生成素受体的两种新配体－－血小板生成素Ⅱ（TPOⅡ）在体内的生物学活性。方法：以Babl/c纯系小鼠为实验对象，通过腹腔连续7d分组注射提纯的TPOⅡ配体Ⅰ、人工合成的TPOⅡ配体Ⅱ及重组的人血小板生成素，并于第7d末测定小鼠外周血小板数量，分析TPOⅡ体内的生物学活性。结果：在实验第7d，TPOⅡ配体Ⅰ实验组小鼠外周血小板数明显高于同期阴性对照组（P＜0.05），与rhTPO阳性对照组相弱则无明显差异（P＞0.05）；第14d，TPOⅡ的两个实验组的血小板数均较同期阴性对照组明显升高（P＜0.01）；与阳性对照组相比亦无明显差异（P＞0.05）。而且随实验时间的延长，TPOⅡ实验组及阳性对照组血小板数均呈升高趋势。结论：提纯的TPOⅡ配体Ⅰ促进小鼠外周血小板的产生，其升高血小板的能力与rhT-PO无明显差别。     

人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达

采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138～139位点插入了赖氨酸甘氨酸天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW, proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34 μkat·mL-1, 细胞密度为106·mL-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×104,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性.     

家族性血小板型出血病16型的遗传诊断与咨询

对1例临床初诊疑似血小板无力症患者结合其家系遗传情况进行基因诊断以明确病因。抽取患者外周血提取DNA,打断DNA并制备文库,通过核酸探针对目标基因编码区和剪切区附近的DNA进行捕获和富集,然后使用高通量测序平台Illumina HiSeq2500进行变异检测,最后对患者及家系成员采用Sanger测序进一步验证。患者ITGA2B基因检出c.2267+1GT的杂合变异,遗传自其父亲,变异与家系中的患者表型紧密连锁。患者疾病明确诊断为由于ITGA2B杂合变异c.2267+1GT引起的家族性血小板型出血病16型。该位点变异为首次报道,研究结果扩展了ITGA2B基因突变谱。     

小剂量静脉丙种球蛋白联合激素治疗特发性血小板减少性紫癜23例疗效观察

观察小剂量静脉丙种球蛋白治疗特发性血小板减少性紫癜（ITP）的临由疗效;将46例ITP患者随机分为两组：对照组23例,予地塞米松每日1．5mg／kg,连用5d后改用强的松,每日1．0mg/kg,顿服,总疗程4—6周;治疗组23例,在对照组基础上予静脉滴注丙种球蛋白,每日0．2g/kg,连用5d;治疗组与对照组比较,治疗组血小板上升速度明显高于对照,两者比较差异有显著性意义（P〈0．01）;小剂量静脉丙球联合地塞米松治疗ITP较单纯应用地塞米松能够更快地升高血小板,可作为首选治疗方法。     

成年男性血小板正常参考值与地理环境的关系

为了给制定中国成年男性血小板正常参考值的统一标准提供科学依据,收集了中国100个单位测定的12670例成年男性血小板正常参考值,应用SPSS统计软件,运用相关分析和回归分析的方法,研究了其与7项地理因素指标的关系。     

虎杖苷对血栓形成及血小板与中性粒细胞间相互作用的影响

 采用电刺激大鼠颈动脉血栓形成和结扎大鼠下腔静脉方法评价虎杖苷(polydatin,PD)的抗血栓形成作用;应用玫瑰花结试验和Born比浊法观察PD对血小板与中性粒细胞之间的相互作用.实验结果显示:PD对电刺激大鼠颈动脉及结扎大鼠下腔静脉引起的血栓形成具有明显的对抗作用;PD明显抑制凝血酶引起的血小板与中性粒细胞间的粘附作用和肉豆蔻佛波醇(N-formyl-methiongl-leucyl-phenylalanine,fMLP)激活的中性粒细胞悬液引起的血小板聚集作用,其半数抑制浓度(medium inhibitory concentration,IC₅₀)分别为51.9,307.6μmol/L.本实验提示PD有明显的抗血栓形成作用,其机制与阻抑血小板与中性粒细胞间的相互作用密切相关.     

竹叶青蛇毒5‘—核苷酸酶对血小板聚集功能的抑制机制…

本文报道了竹叶青蛇毒中分离的５＇－核苷酸酶对家兔血小板的聚集抑制机制探讨。该酶能抑制ＡＤＰ、ＡＡ、ＴＭＶＡ、凝血酶诱导的血小板聚集，且对ＡＤＰ诱导的血小板聚集有明显的解聚作用。其抑制率与剂量增加成正比。该酶在抑制ＡＡ和ＴＭＶＡ诱导的血小板聚集的同时，对于血小板中５－羟色胺（５－ＨＴ）释放亦有明显抑制，抑制率同样与剂量相关，不能抑制ＴＸＢ２的生成。洗涤血小板抑制作用实验表明对竹叶青蛇毒５＇－核苷酸酶     

大鼠主动脉球囊内皮剥脱对血小板活化功能的影响

目的：观察大鼠主动脉球囊内皮剥脱对血小板活化的影响。方法：在大鼠主动脉球囊内皮剥脱模型上，分别于术后7、14和21天观察球囊内皮剥脱对血小板活化的影响。结果：大鼠球囊内皮剥脱术后，于7、14、21天时，血小板聚集明显增强，蛋白激酶（PKC）活性明显增高，环磷酸腺苷（cAMP）活性明显降低，均以7天组最为明显。结论：临床PTCA后较长时间应用抗栓剂是必要的。     

人脐血造血干／祖细胞体外扩增的实验研究

探索脐血造血干／祖细胞体外扩增的最佳条件;初步验证以单个核细胞作为培养起始细胞的可行性,以脐血单个核细胞作为培养起始细胞,在IMDM培养基中加入不同的因子组合培养7d,流式细胞仪测定培养前后的CD34＋细胞百分数、CD34^ CD38^-细胞百分数,分别计算单个核细胞,CD34^ 细胞和CD34^ CD38^-细胞的增长倍数,培养7d后,对照及各组合中脐血单个核细胞总数均比扩增前有十分显著的增加,但各组合相互之间扩增倍数差异不显著,CD34^ 细胞总数均比扩增前有十分显著的增加,加入SCF使扩增倍数增加更明显,未加入SCF组合中的CD34^ CD38^-细胞总数与培养前相比无明显增长,相对于对照扩增倍数也无差异;而加入SCF的组合相对于对照则有明显扩增,以上结果证实以单个核细胞作为培养的起始细胞也能达到较好的扩增效果,在本实验所用的细胞因子组合中,以SCF＋IL01＋IL－3＋IL－6＋GM－CSF＋EPO效果更佳,昆虫细胞基因工程生产的rhSCF及人尿来源的L－TPO对细胞扩增具有刺激作用,两者的协同作用明显。