pEGFP-Egr-1表达质粒构建及其表达抑制HepG2细胞增殖

将RT-PCR扩增的Egr-1基因连接到pMD-18载体上并测序鉴定,经测序正确的Egr-1基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1上构建成重组质粒pEGFP-Egr-1.重组质粒pEGFP-Egr-1转染HepG2细胞后,运用荧光显微镜及荧光定量PCR技术分析其在HepG2细胞中的表达情况,并进一步运用WST-1法分析其表达对HepG2细胞增殖的影响.结果显示,重组质粒pEGFP-Egr-1构建正确,转染后在荧光显微镜下观察可见HepG2细胞发出绿色荧光信号,荧光定量PCR分析发现转染后HepG2细胞Egr-1基因mRNA水平明显升高.WST-1结果表明,与对照组相比,转染pEGFP-Egr-1质粒的HepG2细胞,其增殖速率明显下降.上述结果表明,pEGFP-Egr-1重组质粒构建成功,外来过表达Egr-1基因能够抑制HepG2细胞增殖.     

绿木霉ZY-01中纤维素酶EGⅣ基因的克隆及其在E.coli中的原核表达

以前期筛选到的纤维素酶高产菌株绿木霉T.viride ZY-01的总RNA为模板,利用RT-PCR技术克隆出内切葡聚糖酶EGⅣ基因,连接至pET-28a构建出重组质粒,并转化至E.coli BL21(DE3)中表达。该EGⅣ基因约有1089bp,在启动子T7lac的控制和IPTG的诱导下,目的基因成功地在原核细胞中表达。通过SDSPAGE检测得出目标蛋白分子量为39kDa,重组酶的比酶活为1.05U/mg,该酶最适pH值为6、最适反应温度为50℃。     

按规范拼写英文摘要中的汉语姓名

本文论述了应该统一英文摘要中的汉语姓名的拼写法,使高校学报丰富的文献信息能顺利地通过 CUJA 磁带的方式.在世界范围内得到传播和利用.并例举了种种不规范拼写法.指出了克服的方法.     

中国英语在提升国际话语权中的作用与路径

国际话语权的提升离不开语言这一载体,认同中国英语是中国文化的一部分,借力中国英语是提升中国国际话语权的有效路径之一。为实现有效沟通,建议利用主流媒体统一规范有争议的中国英语表达;鼓励中国公民利用微信、抖音等现代媒体进行民间中国英语交流,表达中国理念和声音;培养译者创新意识,做到“言之有礼”。     

网络表达的道德义务

网络表达是体现网民个体话语权利与自由的形式之一,却常常演变为群体性网络暴力——"平庸之恶",具体表现为泄露隐私、语言群体极化、暴力语言、谣言和不实言论等,造成极大的个体伤害与社会破坏.从伦理学视角来看,其成因是网民心性道德的不足或缺失,在言语行为上表现为言语道德意识薄弱,言语道德义务感不足,言语道德认知匮乏,言语道德智...     

基于非线性回归分析的差异基因选择方法

提出了一种新的用于微阵列基因差异表达多重假设检验的统计量计算方法,该方法利用基因表达值到各类样本数据中心的距离作为统计量进行多重假设检验,各统计量之间没有相关性,并且有效地减弱了数据噪声带来的假阳性结果,从而提高了多重假设检验的功效,所选择出的基因集也具有更好的分类能力.     

中国苦苣苔科植物物种中文名的选定/拟定原则建议初探

近十年来,已知分布于我国的苦苣苔科植物物种数猛增至719种(含种下等级,截至2019年1月),其中有大量的新发表类群。然而,这些新发表物种中,有相当多的一部分发表在国外相关学术期刊上,缺乏中文名的拟定,而且很多甚至在发表的时候就未对其拉丁学名的词源进行诠释。同时,由于近年来分子系统学背景下的科内属一级水平上发生巨大变动,国内不同学科的期刊在发表涉及苦苣苔科植物的文章时,不仅在学名的正确应用上存在一定的滞后和障碍,同时其新旧中文名的更迭以及近年来新分类群中文名拟定的随意性,也给国内该科植物物种多样性及相关的研究带来一定困难。因此,本文尝试梳理和规范苦苣苔科植物的中文名命名规则,以便中国苦苣苔科植物生物多样性研究和实际应用上的使用。这一规范的建立,不仅适合于现在已基本完成的苦苣苔科植物新分类系统,即便是未来在属一级水平上再次进行重组或修订,本规范依然能够适应且能让后来研究者更好地了解苦苣苔科植物的分类和修订历史。     

重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35％,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28．5mg／L),比活为13．5u／mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶 羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。     

重组质粒p434crohis的构建与表达

根据噬菌体４３４ｃｒｏ的基因序列,合成了一对在Ｃｒｏ的Ｃ－末端含有６个Ｈｉｓ密码子的寡核苷酸（６９ｂｐ）,并在其两端设计了ＰｓｔＩ和ＫａｓＩ两个酶切位点。经粘合、退火后将双股寡核苷酸链分别插入ｐ４３４ｃｒｏ（３．３５ｋｂ）质粒的４３８位（ＰｓｔＩ切点）和６３８位（ＫａｓＩ切点）,构建成含４３４ｃｒｏｈｉｓ基因的重组质粒。其表达产物为Ｃ端含有６个Ｈｉｓ的阻遏蛋白４３４ｃｒｏｈｉｓ。经功能测定表明融合蛋白４３４ｃｒｏｈｉｓ仍具有调节ＤＮＡ转录功能,并用金属亲和层析鉴定了表达产物     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。