极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析

选择来源于极端嗜热菌Thermosipho melanesiensis(DSM12029)的普鲁兰酶基因,以购自德国菌种保藏中心的基因组为模板,扩增出普鲁兰酶基因TM-pulA;利用酶切酶连构建了重组质粒pET21a-TM-pulA;转入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中诱导表达并经纯化后,进行了水解产物分析和酶学性质测定.结果显示:TM-pulA为Ⅰ型普鲁兰酶,最适pH为5.8;最适温度是80℃;70℃下半衰期为4.75 h;Mn~(2+)、Co~(2+)、AL~(3+)、Fe~(3+)、SDS及EDTA对其酶活有不同程度的抑制作用;该酶的K_m、V_(max)、K_(cat)及K_(cat)/Km值分别为4.68 g·L~(-1)、0.0085 mmol·L~(-1)·s~(-1)、71.18 s~(-1)、15.21 L·g~(-1)·s~(-1).     

汉语篇章语言学研究的新突破——《汉语篇章中的时间表现形式研究》读后

语言中的时间表达方式是言语交际和自然语言理解的重要信息参量。对语言表现形式的研究,前人时贤都有许多成果。杨同用、徐德宽先生的新作《汉语篇章中的时间表现形式研究》则从篇章的角度观察时间表现形式,发现并研究了许多别人没有注意到的现象和问题。时间范畴是关涉语法、语义及篇章诸多领域的一个重要课题。     

基因组整合与游离质粒联合应用介导阿魏酸酯酶A在马克斯克鲁维酵母中高效分泌表达

阿魏酸是植物中广泛存在的酚类化学物质,具有抗氧化活性.阿魏酸酯酶能够水解植物细胞壁半纤维素和阿魏酸之间的酯键,释放阿魏酸,在食品、医药、饲料加工等领域具有广泛的应用价值.马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)是一种生长迅速、蛋白分泌能力强的新型食品安全级酵母,具有高效分泌表达菊粉酶的能力,本研究利用基因组菊粉酶位点INU1整合与游离质粒联合应用的方式,在马克斯克鲁维酵母中实现了黑曲霉(Aspergillus niger)阿魏酸酯酶AnFaeA的高效表达,发酵液上清中的酶活达到164.4U/mL.利用马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶能够高效降解玉米芯释放阿魏酸,释放量可达1.81mg/g,并且在β-木聚糖酶的协助下可进一步提高阿魏酸的释放量,达到2.8mg/g.     

中文词语内部层次结构标注语料库的建立

针对现有中文自然语言处理研究多以词或者字符为单位,忽视了中文词的内部层次结构的问题,提出一种新的中文词内部层次结构定义标准.该标准定义了内部结构的节点类型和节点内部关系.在此基础上,进一步提出了中文词内部层次结构的标注规范,并且人工标注了含有带内部层次结构的53 918个中文词的词料库.该研究有望为后续的细粒度中文自然语言处理提供新思路.     

汉语上下位关系分类数据集构建和基准方法比较

针对目前缺少较大规模的高质量上下位关系数据集以支持充分的模型训练和评价的问题,提出了一个完整、系统的上下位关系标注规范,并在此规范基础上标注了一个包含15 024个汉语词对的高质量上下位关系数据集.所有数据均采用独立双人标注和专家不一致审核,双人标注一致性达94.20%.并且基于该数据集,对前人提出的几种典型分类方法进行了对比和分析,其中融合多特征的依存路径表示模型的F₁值达到91.95%.     

正式群体安全氛围对建筑工人从众性不安全行为的影响

建立假设理论模型,探究群体安全规范、群体压力、安全意识对建筑工人从众性不安全行为的作用机理.根据调查数据,使用AMOS软件拟合分析模型.结果表明:群体安全规范与群体压力具有显著的双向影响关系,影响路径系数高达0.83;群体安全规范对从众性不安全行为有显著的正向影响,且安全意识是重要的中介变量;群体压力会正向影响从众性不安全行为.     

基于DEVS的目标跟踪系统UML建模

目标跟踪系统的建模是信息融合研究的热点之一.本文在目标跟踪系统分析的基础上,将DEVS的形式化描述和UML图形化描述结合起来,研究DEVS的数学模型到UML类模型的映射关系和建模过程,为目标跟踪系统的设计和实现提供了一种可行的方法,并通过EclipseUML环境下的建模和JAVA编程证明其有效性.     

基于分层的平衡迭代规约聚类分析算法研究

详细分析讨论了BIRCH算法中存在的不足,并针对其不足进行一定的改进,提出了一种基于离差平方和的改进多闻值BIRCH算法,充分利用离差平方和来建立簇与簇的相关性,相对于单纯以簇之间的中心距离来建立相关性有一定的改进,同时在分裂因子的确定上采用了簇中直径的最大值,克服因采用经验值确定分裂因子的缺陷.最后,引入到基因序列图形表达数据聚类分析应用中.     

梗死后大鼠缺血心肌基因差异表达谱构建

为寻找梗死后大鼠缺血心肌差异表达基因, 采用结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支的方法, 建立急性心肌梗死(AMI)模型, 饲养7 d后处死大鼠, 提取正常和缺血心肌总RNA, 应用长标签基因表达系列分析(long serial analysis of gene expression, LongSAGE)构建AMI后大鼠缺血心肌基因差异表达谱, 荧光定量PCR鉴定部分差异基因的表达. 结果显示, 在建立的AMI后缺血心肌和正常心肌组织LongSAGE标签库中, 共获得标签15966个, 正常心肌获得9646个, 梗死后缺血心肌获得9563个. 通过NCBI网站BLAST同源性分析后, 发现新核苷酸序列标签7665个. 与正常组比较, 142个基因在AMI大鼠心肌组织中的表达有显著性差异(P < 0.05), 这些差异基因主要与氧化磷酸化、三磷酸腺苷(ATP)合成、糖异生等能量代谢通路相关. 荧光定量PCR的鉴定结果与LongSAGE差异表达结果基本一致. 结果表明, AMI可引起多基因表达异常, 能量代谢作用通路相关基因的异常表达是造成AMI后心肌损伤的重要分子机制.     

HIV-1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备

为表达HIV-1复合多表位基因并制备其多克隆抗体.设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌.将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET32a并诱导表达.采用Ni2 -NTA亲和柱纯化目的蛋白,以p24抗体对纯化蛋白进行Western-blot分析.将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.通过PCR成功获得长度为651 bp的HIV-1的p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG基因,通过诱导表达,显示在相对分子量约45 000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白.经此纯化的融合蛋白免疫的家兔能产生特异性抗体,其滴度达到1:3 200.纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型HIV疫苗奠定一定的理论和实践基础.