热稳定低温碱性蛋白酶的定向改造

低温碱性蛋白酶是在0℃- 30℃下具有相对较高酶活力的一类碱性蛋白酶,可以广泛应用于食品、洗涤剂、化妆品、水产饲料、制革、纺织等领域,有着中温碱性蛋白酶无法取代的优越性.我国从“七五”到“十五”,国家不断组织专家组对碱性蛋白酶进行研究,已经开发出中温碱性蛋白酶,但热稳定的低温碱性蛋白酶一直没有产业化.原因一是通过筛选诱变获得菌株所产蛋白酶在低温下活力低、热稳定性差,在温度超过50℃,酶活力迅速丧失,不利于加工、贮藏和运输,大大降低了其应用性;二是菌种发酵时产低温碱性蛋白酶的水平较低,和产业化还有较大差距.为使低温碱性蛋白酶能广泛应用到工业加工以及人们日常生活中,开发能产业化的热稳定的低温碱性蛋白酶具有重要意义.     

电子效应参数和拓扑指数用于双苯甲酰胺环脲衍生物—HIV—1蛋白酶抑制剂的QSAR研究

基于基因的电子效应和分子图的拓扑性质，计算了极化效应（PE），场效应（F），共轭效应（C）和边度－距离指数（ED），并用其对29个双苯甲酰胺环脲衍生物的抗HIV－1蛋白酶性进行相关分析，得到较高的相关系数（r=0.9085)，和较低的标准偏差（s=0.26)，表明从电子效应和拓扑性质方面探讨化合物结构－活性之间的关系是一条新的切实可行的思路。     

无溶剂体系中蛋白酶催化氨基酸糖酯合成研究

研究了在无溶剂体系中Α-糜蛋白酶催化N-BOC-L-苯丙氨酸乙酯与D-葡萄糖的酯交换反应,考察了水含量、反应时间、搅拌以及底物摩尔比等因素对酯交换反应的影响。结果表明是在6位伯羟基(6-OH)进行定位酰化。生成的氨基酸葡萄糖酯可通过HPLC-UV定量检测,最适条件下的反应转化率达到90%以上。LC-MS分离并初步定性分析,产物相对分子质量为445,与理论目标产物的一致。     

产碱性冷适蛋白酶菌株Chryseobacterium sp.vv8的鉴定及粗酶性质

为鉴定金黄杆菌属(Chryseobacterium)菌株vv8及分析其胞外蛋白酶的酶学特性,首先,通过分子及生理生化特性对菌株vv8进行鉴定;然后,采用明胶平板筛选法和Lowry法对菌株vv8进行产酶筛选和蛋白酶活性测定;最后,研究pH值、温度、金属离子和抑制剂对该蛋白酶活性的影响.研究结果表明:菌株vv8的16S rDNA与比目鱼黄杆菌(C.scophthalmum)具有98.24%的序列相似性,属于Chryseobacterium属;菌株vv8的最适生长条件是温度为22℃,NaCl质量浓度为0 mg·mL~(-1),pH值为6.0;菌株vv8的胞外蛋白酶在pH值为5.0～10.0,温度为0～90℃范围内均具有酶活性,其最适酶活温度和pH值分别为40℃,8.5;在最适条件下,蛋白酶具有较高的稳定性,在冻干过程中,添加葡萄糖具有明显的酶活保护作用;Fe~(3+),Fe~(2+),Cu~(2+)等金属离子及乙二胺四乙酸(EDTA)对酶活性有明显的抑制作用,该酶对洗衣液和尿素具有较好的耐受性.     

碱性蛋白酶交联聚集体的制备及其催化性能研究

碱性蛋白酶在食品、医药、酿造、丝绸、皮革等行业中发挥着重要作用。制备了碱性蛋白酶交联体,并对其催化性能进行研究。在最佳制备条件下(90%叔丁醇作为沉淀剂,沉淀时间为15min,交联剂浓度为33mmol/L,交联时间为6h),交联酶的酶活回收率为22.6%。与游离酶相比,交联酶的最适pH值向碱性方向变化,由7.5变为8.0,最适温度由60℃变成65℃。酶动力学研究表明,交联酶对酪蛋白的催化水解能力(4.3min-1)比游离酶(3.7min-1)更高。尽管交联酶最大反应速度V_max(9.8mg/(mL·min))低于游离酶(13.3mg/(mL·min)),但交联酶对底物的亲和力K_m(2.3mg/mL)比游离酶(3.6mg/mL)有所增加,而且其热稳定性和酸碱稳定性都得到一定程度的提高。另外,在磷酸盐缓冲液中重复使用5和8批次后,交联酶还能保持82.5%和56.5%的酶活性。     

纤粘连蛋白-整合素相互作用启动胚泡中基质金属蛋白酶活性

纤粘连蛋白是一种主要的细胞外基质，能够与整合素相互作用，介导胚泡的粘附和扩展．首次发现与纤粘连蛋白共同培养的小鼠胚泡产生基质金属蛋白酶－２和－９；若无纤粘连蛋白，小鼠胚泡不产生基质金属蛋白酶－２和－９；焦点粘着激酶是整合素信号转导通路中的关键信号分子，其反义寡聚脱氧核酸显著抑制纤粘连蛋白诱导的胚泡基质金属蛋白酶活性．结果表明，纤粘连蛋白可能通过其整合素受体的信号转导通路，启动小鼠胚泡基质金属蛋白酶－２和－９的表达，协调胚泡的侵入能力和子宫内膜的接受能力，从时间和空间上保证植入相关事件的准确性．     

烤烟叶片中主要酶活性变化规律的研究进展

通过分析烟株及烟叶体内碳氮代谢、脂类代谢，总结出不同栽培及烘烤条件下各代谢及其相关酶活性的变化规律：有机氮和无机氮适当配比，有利于调节碳氮代谢及脂类代谢；随低温及干旱胁迫时间的延长而增加，膜脂过氧化作用加剧：NO3-N处理的烟株抗旱性得到提高：低温变黄使蛋白酶活性持续较长时间，硝酸还原酶活性下降较慢；淀粉酶活性36h前后达到一个高峰，烟叶中淀粉几乎不再降解时淀粉酶仍保持较高的活性；烟叶脂氧合酶活性在34—48h急剧增加达到高峰，然后下降；叶绿素的降解与脂氧合酶活性变化呈显著相关。     

Biosynthesis of selenosubtilisin: A novel way to target selenium into the active site of subtilisin

Glutathione peroxidase （GPx, EC1.11.1.9）, an important anti-oxidative selenoenzyme, can catalyze the reduction of harmful hydroperoxides with concomitant glutathione, thereby protecting cells and other biological issues against oxidative damage. It captures considerable interest in redesign of its function for either the mechanism study or the pharmacological development as an antioxidant. In order to develop a general strategy for specifically targeting and operating selenium in active sites of enzymes, the catalytically essential residue selenocysteine （Sec） was first successfully bioincorporated into the catalytic center of subtilisin by using an auxotrophic expression system. The studies of the catalytic activity and the steady-state kinetics demonstrated that selenosubtilisin is an excellent GPx-like biocatalyst. In comparison with the chemically modified method, biosynthesis exhibits obvious advantages： Sec could be site-directly incorporated into active sites of enzymes to overcome the non-specificity generated by chemical modification. This study provides an important strategy for specifically targeting and operating selenium in the active site of an enzyme.     

氨基酸集团电负性简单计算及应用初探

本文介绍了Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ电负性均衡原理和Ｂｒａｔｓｃｈ集团电负性计算方法，对氨基酸集团电负性进行了系统计算，利用计算结果对胰凝乳蛋白酶进行了分析，就该酶作用机理提出了修正意见。