活性氧在肿瘤坏死因子信号传导中的作用

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是最强的细胞内信号诱导剂之一。它通过对半胱氨酸蛋白酶家族(caspases)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)、c-jun N端激酶(JNK)、核转录因子AP-1和NF-κB的活化,可诱导细胞凋亡、分化和基因转录。此外,TNF也可通过调节细胞的还原状态,特别是内源性活性氧的改变来介导细胞内的信号。综述了ROS在TNF所诱导细胞内信号传导的相关内容,以阐述ROS介导TNF在细胞内信号传导及调节细胞的存活和凋亡中的作用。     

重组基质金属蛋白酶MT5-MMP的表达、 纯化和复性

对已经构建成功并转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3)的基质金属蛋白酶MT5 MMP的催化结构域进行诱导表达, 得到分子量为21000, 包涵体形式的重组蛋白. 通过离子交换树脂对目的蛋白进行纯化后, 用凝胶过滤树脂对纯化后的蛋白进行柱上复性, 得到了具有较高活性的重组蛋白.     

大豆分离蛋白水解多肽聚集物的组成及相互作用

研究了大豆分离蛋白（SPI）的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集作用，以及参与聚集组分的氨基酸组成及其相互作用．十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和SE—HPLC分析显示，SPI的枯草杆菌蛋白酶降解产物大部分为分子质量小于6．5ku的小分子组分，聚集物主要由这些小分子组分组成．聚集物可溶于脲素、盐酸胍或SDS，而难溶于β-巯基乙醇．氨基酸分析显示聚集物中的疏水性氨基酸含量高于SPI．说明疏水相互作用是聚集物形成的主要推动力，氢键、静电引力参与稳定聚集物的结构，而二硫键很少参与聚集物的形成．文中还从蛋白质分子结构的角度，探讨了SPI的枯草杆菌蛋白酶水解多肽的聚集机理．     

不同pH 条件下鳜鱼消化道蛋白酶活性研究

初步研究了不同pH条件下鳜鱼(Sinipercachuatsi)消化道不同部位蛋白酶活性的差异.结果表明鳜鱼消化道不同部位蛋白酶的活性存在较大差异,最适pH也不相同.消化道不同部位蛋白酶的活性强弱顺序为:幽门盲囊>胃>肠前段>肠后段.幽门盲囊的蛋白酶活性最强,明显高于胃、肠前段和肠后段.蛋白酶活性在幽门盲囊的最适pH为8 0～10 4,且在偏碱性条件下有较强的活性;在胃部的最适pH约为2 8,且在偏酸性的条件下活性较高;在肠前段和肠后段的最适pH为9 8.     

鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析

利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine Proteinase,CSP).性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的I型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.     

南极产低温蛋白酶菌株Marinobacter sp.R2的发酵条件及酶学性质研究

从南极海域沉积物中筛选到一产蛋白酶的菌株R2，经细菌学形态特征鉴定及16S rDNA序列分析鉴定，该菌株属于海杆菌属(Marinobacter)．生长特性研究表明该菌株属于兼性嗜冷菌，其最适生长温度为10～15℃．R2菌株能利用多种碳源产酶，最适产酶温度为20℃．粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE cellulose-52柱层析进行初步分离纯化后进行酶学性质的研究．该菌株所分泌蛋白酶的最适作用温度为20℃，最适pH值为9～10，对热敏感．是典型的低温碱性蛋白酶．Ca^2 、Mn^2 、Cu^2 对该蛋白酶有较为明显的激活作用，而Cd^2 、Co^2 则能抑制酶活．高浓度的变性剂、PMSF、AEBSF和EDTA都能抑制该蛋白酶，表明该酶属于丝氨酸蛋白酶，且金属离子对酶活性中心构象有关键性的影响．     

肥大细胞调控IDO诱导的肺癌细胞转移

建立了小鼠肥大细胞体外诱导体系。探究肥大细胞对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。Transwell迁移和侵袭实验检测了与肥大细胞共培养后的细胞2LL侵袭转移能力变化。实验结果表明:肥大细胞能够抑制IDO诱导的细胞2LL的侵袭转移能力。生物信息学分析发现基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)能够抑制促肿瘤转移的基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)以及基质金属蛋白酶-9(MMP9)的表达。Western blot结果表明肥大细胞通过抑制STAT3磷酸化而减少IDO的表达;并通过TIMP1信号通路抑制MMP2、MMP9和VEGF的表达。这些结果表明肥大细胞通过抑制STAT3信号通路磷酸化调控IDO表达和抑制下游TIMP1、MMP2、MMP9信号通路抑制细胞2LL转移能力。     

鲤鱼红色肉中金属蛋白酶的分离纯化与性质分析

通过硫酸铵盐析、DEAE—Sephacel离子交换、Sephacryl S-200凝胶过滤、High-Q离子交换和Gelatin—Sepharose亲和层析等方法,从鲤鱼红色肉中纯化得到分子量为75ku的金属蛋白酶．该酶在碱性条件下显示活性,活性温度范围为30～50℃．金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA能够完全抑制该酶的活性,而其他蛋白酶类抑制剂则不起抑制作用．进一步研究发现,该酶能够有效分解Ⅰ型胶原蛋白和明胶,说明其在鱼体死后肌肉软化过程中起着重要作用．     

特异性siRNA对大鼠肝星状细胞TIMP-1表达的影响

观察金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）小干扰RNA真核表达载体转染肝星状细胞株HSC-T6后TIMP-1基因表达的情况。构建携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的小干扰RNA真核表达载体pGCsi-U6／TIMP-1 shRNA,利用该载体介导四个特异性和一个非特异性的TIMP-1 shRNA,分别为TIMP-1 shRNA1、TIMP-1 shRNA2、TIMP-1 shRNA3、TIMP-1 shRNA4和TIMP-1 shRNA—NON。采用阳离子脂质体介导法转染HSC-T6细胞,激光共聚焦显微镜观察GFP表达,荧光实时定量PCR方法检测TIMP-1 mRNA表达情况。质粒转染HSC—T6细胞后,激光共聚焦显微镜观察转染组细胞内均见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光;mRNA水平检测显示：与正常对照组相比,TIMP-1 shRNA1、TIMP—1 shRNA2和TIMP-1 shRNA4对TIMP-1基因表达较强的抑制作用,尤TIMP-1 shRNA1抑制作用最强（P〈0．01）。pGCsi—U6介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制肝星状细胞中TIMP—1的表达。     

对SPF 大鼠脱毛实例的饲料影响研究

摘要: 目的针对本中心SPF 级实验大鼠易发生的脱毛现象分析其原因,以对实验大鼠的养殖管理提供更加科学的建议。方法通过观察本单位SPF 实验大鼠脱毛的特点,对生长繁殖群常用大鼠饲料的灭菌效果和营养成分进行检测,结合检测结果改进饲料配方,进行治疗试验并观察效果。结果饲料高压灭菌后维生素和微量元素含量变化量较大,使用辐照灭菌饲料以及将维生素含量调整后大鼠脱毛改善情况最明显。结论饲料经过高压灭菌后营养中的维生素含量损失可能是造成SPF 大鼠脱毛的重要原因,在日常饲养中使用辐照饲料更加科学。