病毒性肝炎与HCC关系的临床研究

目的 探讨病毒型肝炎与ＨＣＣ的关系。方法 对８３例患者进行临床分析。结果 ８３例ＨＣＣ患者中单纯型２７例，硬化型４７例，炎症型９例。结论 病毒型肝炎是ＨＣＣ的主要病因之一。     

紫杉醇对体外大鼠肝细胞影响的实验研究

目的:在通过观察紫杉醇对体外培养大鼠肝细胞的影响来探讨紫杉醇自身毒副作用.方法:采用四唑盐(MTT)比色法及形态学方法观察紫杉醇在不同质量浓度下作用不同时间对肝细胞的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法观察紫杉醇作用后,肝细胞的形态变化.结果:质量浓度分别为5、10、20、40、80μg/L的紫杉醇分别作用24、48、72 h后,随着质量浓度的增加、作用时间的延长对体外培养的肝细胞损伤加大、抑制率增加;相同质量浓度的紫杉醇不同作用时间的抑制率无时间效应关系;24 h的IC50质量浓度为28.5μg/L,并能诱导肝细胞发生凋亡.结论:紫杉醇在一定的质量浓度和长时间作用下对肝细胞有细胞毒作用.     

基于裸鼠模型研究EGFL9对肝癌细胞增殖、转移能力的调控作用

目的:旨在通过裸鼠模型分析EGFL9对肝癌细胞增殖、转移能力的影响。方法:通过慢病毒介导的小干扰RNA技术构建EGFL9沉默的JHH-7肝癌细胞系。采用MTT生长曲线分析EGFL9对JHH-7肝癌细胞增殖能力的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验和尾静脉注射转移实验观察EGFL9基因在动物活体内对JHH-7肝癌细胞增殖、转移能力的影响。结果:荧光显微镜观察结果显示JHH-7^shEGFL9组和JHH-7^shCtrl组肝癌细胞慢病毒感染效率高于80%,qRT-PCR检测结果显示JHH-7^shEGFL9组EGFL9干扰效率达98.3%,提示EGFL9沉默的JHH-7人肝癌细胞系构建成功。MTT生长曲线结果提示,JHH-7^shEGFL9组肝癌细胞的增殖能力明显低于JHH-7^shCtrl组(P<0.05)。裸鼠皮下成瘤实验显示,JHH-7^shEGFL9组裸鼠皮下肿瘤的质量[(0.246±0.104)g vs(0.710±0.221)g]和瘤体体积均显著小于JHH-7     

新型雌激素受体ERα36在张氏肝细胞和人肝癌细胞中的表达比较分析

研究新型雌激素受体ERα36在人肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达具有重要的意义.以张氏肝(Chang Liv-er)、Caveolin-1基因沉默细胞株CAV7、人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2为实验材料,通过免疫印迹杂交法观察了不同细胞内ERα36蛋白的表达情况,并与典型雌激素受体亚型ERα66蛋白的表达进行了比较.结果发现:(1)几种细胞中均有ERα36蛋白的表达;(2)与张氏肝细胞相比,Caveolin-1基因沉默时ERα36表达明显增加(P0.01);(3)ERα36在SMMC-7721中表达水平较低,而在HepG2细胞中表达水平较高,与ERα66和Caveolin-1的表达水平相关.提示新型雌激素受体ERα36可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,而在肝细胞的恶性增殖过程中发挥一定的作用.     

Therapeutic angiogenesis induced by human hepatocyte growth factor gene in hindlimb ischemia of dogs

A preclinical study of treating peripheral srtery occlusive disease(PAD) was performed by using a hepatocyte growth factor(HGF) gene-expressing vector,plasmid pUDKH,in a dog model with complete ischemia of one hindlimb.After ligation of femoral artery of one hindlimb,pUDKH was transferred directly into the ischemic limb muscles.The angiogenic activity of the plasmid pUDKH was evaluated.On D 30 after injecting once of pUDKH at differ-ent doses into local muscles immediately after operation,the degree of augmentation of collateral vessel formation was significantly greater than that treated by blank vector.In addition,the blood flow rate of femoral artery in dogs treated with pUDKH was recovered on D90,while the folw rate was only 1/5 tp 1/3 in control dogs.The pulse amplitude of pUDKH-treated dogs was recovered on D90,but it was hardly detectable in most of the control dogs.The side effects of intramuscular transfection of pUDKH were also investi-gated,and no significant positive change was found.It is suggested that angiogenesis induced by HGF gene has the potential for clincal use in the treatment of peripheral arte-rial diseases.     

SV40T/pcDNA3.1重组质粒的构建及在肝细胞中的表达

构建重组质粒SV40T/pcDNA3.1,为建立永生化肝细胞系奠定基础。pcD2质粒经BamH Ⅰ单酶切获得SV40T基因片段,并将其捕入pcDNA3.1载体,经酶切鉴定证实,SV40T基因片段已成功插入载体中,采用常规方法分离培养肝细胞,用SV40T单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,验证其在肝细胞中的表达。     

人乙肝病毒DNA在感染树鼩肝细胞内状态的研究

为探讨人乙肝病毒ＤＮＡ在树Ｑｕ肝细胞内存在状态，对经血清学证明已被感染的树Ｑｕ肝组织进行转移印迹杂交分析。结果，在实验感染早期的树Ｑｕ肝细胞检出ＨＢＶ ＤＮＡ复制的中间体；在实验中晚期的动物肝细胞发现整合型的ＨＢＶ ＤＮＡ。表明树Ｑｕ肝对ＨＨＢＶ敏感，可成为乙肝和肝细胞癌发病机理研究及治疗乙肝药物筛选的较好的实验动物模型。     

转基因肝星状细胞定向诱导骨髓Thy-1+β2M-细胞向肝细胞分化

体内移植研究表明, 骨髓来源的干细胞具有向成熟的肝细胞分化的能力. 然而, 成体干细胞向肝细胞诱导分化的效率、分化细胞的功能状态、微环境对细胞分化的影响等均存在许多疑问. 以高效、稳定表达肝细胞生长因子的肝星状细胞株CFSC/HGF作为饲养细胞, 成功地将大鼠骨髓来源的Thy-1⁺β₂M^-细胞(bone marrow derived Thy-1⁺β₂M^-cells, BDTCs)诱导为肝细胞, 经RT-PCR和免疫荧光化学检测证实, 该条件下诱导后的BDTCs表达幼稚或成熟肝细胞特异性的基因, 分化细胞具有成熟肝细胞特有的靛青绿摄取排泌、氨基代谢和白蛋白分泌的功能, 提示肝细胞生长因子、肝脏非实质细胞及其产生的细胞外基质为骨髓干细胞向肝细胞分化提供了适宜的微环境. 这为以骨髓干细胞为基础的再生医学在终末期肝病治疗中的应用提供了理论和技术上的支持.     

肿瘤标志物联合检测在原发性肝细胞癌早期诊断中的应用

用生物发光免疫分析法、 比色法联合检测确诊的原发性肝细胞癌（53例）、 乙型病毒 性肝炎（80例）、 慢性乙肝合并肝硬化（34例）患者同份血清的肿瘤标志物甲种胎儿蛋白( AFP)和肿瘤特异性生长因子(TSGF)．　结果显示, 原发性肝细胞癌组血清TSGF和AFP与其他 组比较均有显著差异（P<0.01）; 原发性肝癌组中TSGF与AFP联合阳性检出率为96.2 %． 关键词: 生物发光免疫分析技术; 甲种胎儿蛋白; 肿瘤特异性生长因子; 原发性肝细胞癌