山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础。用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率,以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件。结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P<0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P<0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P>0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则。结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后,在400V/200μs条件下电击1次。     

新生命能否“子承父业”

参展犬冠军格伦帕克守卫者是一只很受瞩目的狗,这只被称为“特洛伊”的短毛犬的精子是在1989年首次采用试管受精时冷冻起来的,在它去世后20年,兽医通过一种新的方法,将它的精子给它的后代斯塔进行了人工受精,迎来了这三只健康的小狗崽的诞生,其中两只公狗,一只母狗。     

不同渗透压对长吻鮠精子活力的影响

观察了长吻鮠精子在0-300毫渗(mOsm)氯化钠、氯化钾溶液中的活动情况。在氯化钠、氯化钾溶液中,长吻鮠精子快速运动时间和寿命的变化规律基本一致,精子活动最适渗透压介于150-200mOsm之间。钾离子有延长精子寿命的作用。为长吻鮠精液稀释液的配制提供了实验依据。     

雷公藤多苷致大鼠精子畸形初步研究

目的 采用雷公藤(Tripterygium wilfordii)多苷灌胃造模,分析大鼠精子异常形态,详细描述大鼠精子异常形态类型,为研究大鼠精子畸形提供参考.方法 雄性成年SD大鼠,雷公藤多苷剂量为30 mg/kg灌胃,给药4周及8周后,分别取大鼠附睾精子,用Diff-Quik染色法,在光镜下行精子形态分析.结果 (1...     

弱精症患者精子miRNA表达谱的构建和分析

应用基因芯片技术构建弱精症患者精子中miRNA表达谱．收集30份弱精症患者精液标本和20份成年健康有生育能力男性的精液标本,提取精子RNA,标记后,与miRCURY^TM Array芯片杂交．分析弱精症患者精于中miRNA表达情况．高活力精子和低活力精子共196个miRNA存在表达差异,上调miRNA93个,下调miRNA103个．弱精症患者精子miRNA表达谱的建立对分析精子运动的分子机制和探讨弱精症的病因将会有所帮助．     

不同解冻方法对辽宁绒山羊精子活力的影响

通过比较三种精液冷冻保存稀释液配方（A、B、C）对山羊细管冷冻精解冻后精子活力的影响,结果表明,三种稀释液配方（A、B、C）,冷冻-解冻后精子活力有极显著的差异（P〈0．01）,分别为42．57％、37．34％、33．03％,A显著优于B液和C液．而且用不同的水浴温度和解冻时间进行解冻,通过精子活力的比较,寻找出最佳的解冻温度为38℃,解冻时间为60s．     

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经ψ=0.5%的NP-40洗脱后,先经伴刀豆凝集素Con A(Concanavalin A)亲和层析分离,经SDS-PAGE电泳,得到相对分子质量Mr分别为32×103,26×103,20×103的3种与Con A结合的糖蛋白CBG(Con A binding glycoprotein).再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶(Sephadex G-100)层析柱进一步纯化,得到Mr为26×103的单一成分.将26×103 CBG免疫兔后制得抗血清,经PAP免疫组织化学染色发现:26×103的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区,同时鼠精子表面也有同样分布,说明26×103的CBG抗原具有种同保守性.后将26×102的CBG免疫雌鼠,发现其产仔率由对照组的(8.5士2.6)只(n=12)减少到(4.3士1. 8)只(n=24),经t检验(不配对,单尾),二者间差异极显著(p＜0.001).本实验结果表明:26×103的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用,并有可能开发为人工避孕疫苗.     

骨营养素安全性毒理学实验研究

目的检测骨营养素作为保健食品的安全性。方法依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》,通过小鼠经口急性毒性试验、致突变试验,大鼠30 d喂养试验对骨营养素进行检测。结果小鼠经口LD50>21.5 g/kg,属无毒级物质;致突变试验结果为阴性;大鼠30 d喂养试验表明,各剂量组体重增长、食物利用率、脏体比、血液学及血清生化指标与对照组比较均无显着性差异(P>0.05),通过病理检查,主要脏器未发现与实验有关的病变。结论骨营养素为无毒、无致突变作用的保健食品。     

多菇口服液毒理安全性实验研究

目的检测多菇口服液作为保健食品的安全性。方法通过小鼠经口急性毒性试验、致突变试验,大鼠30d喂养试验对多菇口服液进行检测。结果小鼠经口LD50>21.5g/kg,属无毒级物质;致突变试验结果为阴性;大鼠30d喂养试验表明各剂量组体重增长、食物利用率、脏体比、血液学及血清生化指标与对照组比较均无显着性差异(P>0.05)。病理检查主要脏器未发现与实验有关的病理性改变。结论多菇口服液为无毒、无致突变作用的保健食品。     

甲醛对雄性小鼠生殖细胞毒作用的研究

研究了液态和气态甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,液态甲醛染毒剂量分别为0．20,2．00,20．00mg／kg体重,采用腹腔注射染毒7d,观察睾丸组织的病理改变,并计算脏器系数、精子存活率、活动率、精子数及畸形率．气态甲醛染毒剂量分别为0．5,1．0,3．0mg／m^3,连续动态染毒72h,于首次染毒后第15天观察睾丸细胞的微核率,结果表明,液态甲醛能引起睾丸组织病理损伤,脏器系数、精子存活率、活动率和精子数减少,畸形率升高;气态,甲醛能诱导早期精细胞微核率增加,均呈现一定的剂量反应关系,液态甲醛和气体甲醛均具有小鼠生殖细胞毒性。