猫疱疹病毒Ⅰ型( FHV-1) 抗体 ELISA 检测方法的建立与初步应用

摘要: 目的 建立猫疱疹病毒Ⅰ型( FHV-1) 抗体 ELISA 检测方法,应用于临床样品中 FHV-1 抗体的检测。方法 培养猫肾传代细胞( CRFK) ,接种 FHV-1 病毒,制备 CRFK 正常抗原和 FHV-1 特异抗原,滴定山羊抗猫 IgG-HRP 和 抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、稳定性及精密性实验。结果 正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工 作浓度分别为 0. 05 μg /mL、10 μg /mL 和 1∶ 5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为 8. 7% 和 5. 8% ,批间平均变异系数分别为 11. 9% 和 6. 6% ; 检测灵敏度为 1∶ 6 400; 与猫细小病毒( FPV) 、猫杯状病毒( FCV) 均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于 25% 。结论 建立的 ELISA 方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强,可用于猫 FHV-1 抗体的检测。     

应用TD—PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒

从DNA水平上鉴定猴B病毒，并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1)；用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增，并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切，对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳；电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp，酶切后，B病毒能产生72bp和56bp片段，而HSV-1不能产生酶切产物；该方法能较好地鉴定猴B病毒，同时也将有密切抗原关系的HSV-l区分开来。     

人类疱疹病毒7 U41蛋白DNA链结合能力分析

目的 :对人类疱疹病毒 7(humanherpesvirus 7,HHV - 7)U4 1的核酸结合能力进行分析鉴定。方法 :DNA结合蛋白分离收集、免疫沉淀及Western印迹检测U4 1蛋白对单、双链DNA的不同结合能力。结果 :U4 1蛋白能结合单链DNA而不能结合双链DNA。结论 :U4 1的功能之一是保持DNA模板的合适构型 ,以便DNA的延伸和病毒DNA的合成。     

牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性

通过同源重组将pHA2质粒插入到牛Ⅰ型疱疹病毒ZJ分离株基因组的UL15和UL18基因之间, 构建了重组病毒rBHV1-HA; 提取重组病毒的环状基因组DNA, 转化大肠杆菌DH10B, 获得了含有BHV1全基因组的感染性细菌人工染色体克隆pBHV1. pBHV1转染MDBK细胞可以拯救出病毒, 该病毒与野生毒株在细胞上的繁殖特性未见差异. 通过两步Red E/T重组, 构建了gN基因跨膜区缺失的pBHV1突变体, 并转染获得了重组病毒rBHV1-?gN. 病毒繁殖动态曲线显示, rBHV1-?gN的滴度比野生毒株低9%~20%. BHV1感染性克隆的成功构建, 将为研究新型BHV-1基因缺失疫苗和牛的病毒载体疫苗提供技术平台.     

广州地区AIDS患者中人类疱疹病毒8感染的检测

目的:检测广州地区艾滋病AIDS患者中人类疱疹病毒8(HHV-8)的感染状况,探讨本地区AIDS患者发生HHV-8感染相关疾病的可能风险。方法:采用巢式聚合酶链反应(n-PCR)法检测患者唾液中的HHV-8 DNA。结果:在广州地区AIDS患者唾液中HHV-8 DNA阳性率为20.0%,而对照组的阳性率为0,两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:在广州地区的AIDS患者中存在较高的HHV-8感染。     

同源于hMIP-1α的vMIPα对人趋化因子受体的作用

HIV感染靶细胞须以人CD4^ 白细胞膜上的趋化因子受体为共受体,与此共受体结合的趋化因子类似物可阻HIV进入靶细胞。实验目的是了解与人趋化因子单核细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）同源的人疱疹病毒8K6基因编码产物vMIPα是否具有结合人趋化因子受体的功能。首先用蛋白质同源分析及蛋白空间结构模拟等对比vMIPα与人趋化因子的结构异同,用PCR扩增出K6片段,克隆于哺乳类细胞表达载体,转染于NIH3T3细胞,得到条件培养液。然后将K6基因在大肠杆菌中表达,得表达产vMIPα。结果显示转染K6的NIH3T3细胞含有vMIPα单一分子量的mRNA,此转染细胞的条件培养液及大肠杆菌表达纯化的vMIPα可与人趋化因子^125I-hMIP-1α竞争结合外周血单核细胞的CCR5受体,而且此条件培养液及vMIPα不引起外周血单核细胞对ICAM-1的黏附反应。研究证实K6编码产物vMIPα与CCR5培养液及vMIPα不引起外周血单核细胞对ICAM-1的黏附反应。研究证实K6编码产物vMIPα与CCR5结合但不引起细胞黏附反应,即封闭HIV的CCR5共受体,提示有用于防治HIV/艾滋病的可能性。     

κ-卡拉胶寡糖的酶解制备及其体外抗病毒活性

 利用Pseudoalteromonas sp.AJ5-13菌株所产生的κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶制备κ-卡拉胶寡糖,通过电喷雾离子化飞行时间质谱（ ESI-TOF-MS）和核磁共振波谱（¹³C-NMR）分析,该酶的水解产物主要是硫酸κ-新卡拉二糖、硫酸κ-新卡拉四糖、硫酸κ-新卡拉六糖、硫酸κ-新卡拉八糖和硫酸κ-新卡拉十糖,确定该κ-卡拉胶酶专门水解κ-卡拉胶3,6-内醚-D-半乳糖和4-硫酸-D-半乳糖之间的β-1,4糖苷键,产生3,6-内醚-D-半乳糖作为非还原端,D-半乳糖作为还原端的κ-新卡拉寡糖。采用体外Vero细胞培养法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法研究了寡糖抗标准单纯疱疹病毒1型(HSV-1)活性 。结果表明,κ-新卡拉寡糖对Vero细胞毒性极低,可干扰HSV-1毒株向Vero细胞的吸附。     

5-取代嘧啶核苷及其抗疱疹病毒活性

介绍了一些具有显著抗疱疹病毒活性的5-取代嘧啶类核苷衍生物以及它们的作用机理,指出了不同取代基对相应化合物生物活性的影响,并对部分化合物进行了构效关系总结.     

DNA肿瘤病毒

致瘤性病毒分为RNA肿瘤病毒和DNA肿瘤病毒。前者主要引起白血病和淋巴瘤；后者主要是本书描述的多瘤病毒、EBV、腺病毒以及疱疹病毒等。两位作者都是肿瘤病毒分子生物学以及病毒导致肿瘤发生的机理研究专家。     

双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型的初步探讨

目的探讨双黄连口服液体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用.方法选用非洲绿猴肾细胞VERO作为体外培养靶细胞,建立HSV-1感染,用不同剂量的双黄连口服液处理HSV-1感染细胞,以50%组织细胞感染量(TCDI50),细胞病变效应(CPE)为评测指标;采用MTT法,RT-PCR及流式细胞技术作为检测手段并比较药物处理组与HSV-1感染组细胞间病毒表达的差异.结果浓度为标准剂量10%的口服液可明显抑制HSV-1 gD 基因mRNA的转录,选择性抑制HSV-1 DNA的合成;在标准药物剂量0.1%-10%范围内病毒感染组细胞与实验组细胞间凋亡呈现差异性.结论双黄连口服液对体外感染的HSV-1型病毒存在抑制作用,显示出一定的抗病毒活性.