海洋极端微生物和极端酶分子生物学研究

分离自海洋极端微生物的极端酶具有超常的生物学稳定性，能够在极端温度、pH值、压力和离子强度下表现出生物学活性，因此海洋极端酶为生物催化和生物转化提供了良机。新的极端物种的发现、基因组序列的确定及基因工程技术的应用，加快了发现和制各新酶的进程。蛋白质工程和定向进化技术进一步改善酶的活性和特异性，促进了海洋极端酶的工业应用。对极端酶的分子生物学研究加深了人们对酶稳定性机制的理解，丰富了分子进化理论。     

噬菌体展示蛋白质芯片的无标记检测

为获得丰富的特异识别分子和实现无标记、高灵敏度检测,利用噬菌体展示技术,选择在pⅢ蛋白上展示12肽的噬菌体M13作探针,采用羧基-氨基共价耦联法制备噬菌体展示蛋白质芯片.在此基础上,与表面等离子体共振传感技术结合,使用Biacore3000仪器,检测噬菌体展示蛋白质芯片与特异性抗体的反应,测定反应动力学常数.实验结果表明:当抗体浓度为0.4 μmol·L-1时,响应信号可达365±8个单位;不同浓度的抗体与芯片反应的数据较好地与S型曲线吻合.该方法可望用于噬菌体展示蛋白质芯片的检测.     

毛细管电泳定量分析兔血管平滑肌细胞内外源基因RT-PCR产物

目的 应用毛细管电泳的方法定量分析体外培养的兔血管平滑肌细胞中外源基因Mrna的表达水平.方法 构建兔特异性金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP-3)基因重组质粒载体,通过阳离子脂质体介导转染兔平滑肌细胞;实验分为重组质粒组、空质粒载体组、正常对照组;转染48小时后抽提各组总RNA,按照RT-PCR方法进行扩增;对重组质粒载体进行双酶切,提纯TIMP-3DNA并进行浓度测定,按照已知浓度对其进行毛细管电泳,绘制TIMP-3DNA标准浓度曲线图;对RT-PCR产物分别进行琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳,观察结果并依据标准浓度曲线公式计算RT-PCR产物的含量.结果 琼脂糖凝胶电泳中,重组质粒组在TIMP-3基因相应的碱基位置出现明显的阳性条带,而其他两组未见明显的条带;毛细管电泳结果显示重组质粒组TIMP-3DNA含量明显高于正常对照组及空载体质粒组,P＜0.05,差别具有显著性意义.讨论 CE是一种高效的定性定量方法,RT-PCR产物可以用毛细管电泳直接分离定量.     

化学生物学生物分子识别研究取得可喜进展

中国科学院长春应用化学研究所稀土化学与物理重点实验室曲晓刚研究员所领导的生物无机化学研究组，在中国科学院“百人计划”及国家杰出青年科学基金等项目的支持下，在核酸序列特异性识别及构象功能转化方面取得了突破性进展．研究组关于纳米管与四链DNA作用的最新研究结果发表在国际权威期刊《美国科学院院刊》（PNAS2006，103，19658-19663）上．     

循环肿瘤细胞捕获微纳技术

循环肿瘤细胞被认为是肿瘤转移的一个重要因素,其精确检测对监控患者病情、治疗效果以及预测预后具有重要的临床指导意义。然而,由于在外周血中的循环肿瘤细胞个数极少,对它的检测要求使用高特异性、高灵敏度的快速检测技术。近些年纳米技术的发展为循环肿瘤细胞的检测提供了新的机遇。文章综述了近年来循环肿瘤细胞分离与检测技术的研究进展,重点介绍了纳米材料、微流控技术在循环肿瘤细胞捕获中发挥的重要性。     

片形吸虫成虫虫体抗原制备及ELISA实验研究

目的:研究人体片形吸虫病ELISA检测试剂盒的检测效果。方法:采用云南大理本地采集的牛体片形吸虫成虫制备可溶性粗抗原,包被反应板,采用人体片形吸虫病ELISA法(FAWA-ELISA)进行研究,分别检测26份片形吸虫患者血清、102份其他寄生虫病患者血清和25份健康人血清,评价检测试剂盒的检测效果。结果:检测试剂盒的敏感性为100.0%、特异性分别为95.28%(95%CI:98.9%~91.2%),约登指数分别为0.95。结论:FAWA-ELISA试剂盒检测效果较好,且成本相对较低,可适宜用于云南片形吸虫病流行区流行病学筛查,减轻病原学检测的工作量。     

甲状腺激素对小鼠免疫功能的影响

本文研究了甲状腺激素对小鼠免疫功能的影响。实验结果表明:1)每天灌胃0.5或2mg 甲状腺激素,连续给药15天,不仅可以明显地促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,且可明显增加小鼠外周血 T 淋巴细胞的数量;2)每天灌胃上述剂量的甲状腺激素,连续给药18天,可使特异性抗体的形成明显增强,而每天灌胃2mg 甲基硫氧嘧啶,连续给药18天,则使特异性抗体的形成明显减弱。甲状腺激素可能是参与免疫功能生理性调节的重要物质。     

针对人食管癌细胞株ECa109的免疫脂质体的制备及其与细胞的相互作用

脂质体作为一种新的基因和药物载体越来越受到人们的重视.为使脂质体能携带其包裹物有效地到达靶细胞或靶组织,近年来出现了免疫脂质体(Immune liposome).Huang等利用脂肪酸的N-烃基琥珀酰亚脂肪成功地实现了脂肪酸与抗体IgG的偶联,制成了针     

左氧氟沙星人工抗原的制备及其抗体鉴定

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星与载体蛋白牛血清白蛋白偶联制备免疫抗原,用氯甲酸异丁酯法将左氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联,制备包被检测抗原,采用紫外扫描法对合成的抗原进行鉴定.用免疫抗原免疫大白兔获得抗左氧氟沙星多克隆抗体血清,经间接ELISA试验检测特异性抗体效价,测得效价达1:212以上.通过紫外扫描及间接ELISA试验,结果表明,制备的抗原和抗体获得成功.     

定点突变提高豆豉纤溶酶的酶活力和底物特异性的研究

以pBE—DFE质粒为模板,采用反向长距离PCR技术对豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE)基因进行定点突变,使位于酶的底物结合区第156位的谷氨酸和第166位的甘氨酸分别替换为丝氨酸和丙氨酸,使临近酶的底物结合区的第169位甘氨酸残基替换为丙氨酸,获得了三个突变体E156S,G166A和G169A.将含突变基因的表达载体转化枯草杆菌WB800,构建了豆豉纤溶酶基因突变体的表达菌株WB800(E156S);WB800(G166A)和WB800(G166A).将3种表达菌株进行液体发酵培养,结果发现发酵上清液中纤溶酶的纤溶活性为460,790和900U/mL,分别是未突变酶活性(660U/mL)的70%,115%和136%;3种突变酶对合成底物的H-D-Val-Leu-Lys-pNA的酰胺水解活性是未突变酶的17%,125%和121%.