分子印章法DNA芯片合成(Ⅲ)——反应条件的优化

对分子印章法制备寡核苷酸微阵列芯片的工艺条件进行了探索.研究了对寡核苷酸压印偶联反应影响较大的3个因素核酸反应液反应活性的稳定性、点阵上不同核酸单体残留物的交叉污染和封闭反应对寡核苷酸微阵列杂交结果的影响.实验研究表明,在氩气保护(水和氧含量低于5×10-6)下四和核苷酸单体的乙腈混合液的反应活性可保持10 h以上.采用了一种含羟基小分子的液体对压印偶联反应后的芯片进行处理,成功地清除了芯片上大量剩余的活性核酸单体分子,解决了它们对临近点阵可能产生的污染问题.最后指出了在寡核苷酸微阵列制备过程中可以舍弃通常DNA固相合成工艺中的封闭反应步骤,有效地提高了DNA芯片的制备效率.上述研究表明分子印章法制备寡核苷酸微阵列芯片不仅可行,而且经济.     

糖尿病肾病大鼠胰基因组DNA甲基化状态的变化

分别从正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药糖微康治疗的糖尿病肾病大鼠 、西药开博通治疗的糖尿病肾病大鼠的胰组织中提取其基因组DNA,用对DNA甲基化作用敏感 的限制性核酸内切酶HpaⅡ和MspⅠ(为一组同裂酶)进行限制性酶切;并进行染色质DNaseⅠ敏感性分析. 实验发现中药糖微康治疗后能向正常方向逆转胰组织DNA中CCGG位点甲基化状态,胰组织中处于转录活性状态的染色质明显增加. 这表明中药糖微康能通过提高基因转录水平和向正常方向恢复甲基化状态而发挥其治疗作用.     

研制安全病毒疫苗

主要研究内容 早期生产小儿脊髓灰质炎病毒疫苗所用猴肾原代细胞曾发生SV40病毒传播,近年患者使用人脑垂体制备的人生长激素曾传播疯牛病,人类输血及使用血源产品曾传播艾滋病病毒.诸如此类的报道近年在媒体并不鲜见,人们不禁对使用原代细胞的安全性问题产生了担忧.自人类二倍体细胞(HDC)成功用作病毒活疫苗细胞培养基质以来,异种动物传代细胞系(CCL)用作生物制品及生物工程产品细胞培养基质的重要性进一步显示出来,它必将加快传代细胞系用作病毒活疫苗培养基质的步伐.     

反义核酸Ⅷ C真核表达载体的构建及其对转化血管内皮细胞的影响

利用人工合成的部分反义核酸ⅧC(以pⅧC表示)用以构建含有部分反义凝血因子基因片段的真核表达质粒pXJ41-neo/pⅧC,再用磷酸钙介导转染血管内皮细胞,筛选出阳性克隆血管内皮细胞,扩大培养转基因细胞,用金黄色葡萄球菌凝集试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转基因细胞ⅧC蛋白质的表达水平.结果表明所构件人工合成的部分反义核酸pⅧC真核表达载体能有效抑制人的凝血因子ⅧC的表达,因此建立了有效表达反义核酸pⅧC的血管内皮细胞模型.     

阿的平荧光猝灭法测定DNA

在室温条件下，阿的平能嵌入DNA的碱基对之间，而阿的平荧光大幅猝灭，酸性介质下，激发波长348，428或449nm，碱性介质下激发波长为362或422nm,发射波长均为502nm，基于此对核酸进行定量测定，方法简单，快速，灵敏，对于双链或单链小牛胸腺DNA，线性范围0－4μg/mL，检测限0．03μg/mL，共存物质干扰小，在不同浓度ctDNA存在下，温度对荧光光猝灭的影响结果显示猝灭方式为静态猝灭。     

转基因蔬菜口服疫苗研究进展

本文介绍了转基因蔬菜口服疫苗的优点，转基因植物口服疫苗在动物和人体中的应用和存在的问题。     

山西运城盐湖卤虫核酸的初步研究

本文对山西运城盐湖卤虫的总 RNA、tRNA 及 rRNA 进行了分离纯化及测定,结果表明运城盐湖卤虫每克干重成虫的总 RNA 为1.94mg,tRNA 为0.25mg,卤虫卵 RNA的(G+C)％为34.6。同时还发现这种卤虫卵与天津卤虫卵的 DNA 的碱基组成可能存在极微小差异。     

小牛胸腺DNA的激光喇曼谱

用常规喇曼和表面增强喇曼的方法获得了小牛胸腺ＤＮＡ固体纤维和水溶液的激光喇曼谱，样品的喇曼特征谱带与国外文献及国内紫外共振喇曼法得到的谱图基本一致，由此可分析出样品的构象，基团归属等信息，证明喇曼光谱是用于测量生物分子结构的一个有力武器。     

热休克对粗糙脉孢菌核酸内外切酶的影响

将快速生长的粗糙脉孢菌Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａｃｒａｓｓａ培养液从３０℃升温至４５℃，热休克处理２小时，７５％有活性的核酸内外切酶ｅｎｄｏ－ｅｘｏｎｕｌｅａｓｅ（此酶为ＤＮＡ修复酶）从核及液泡中释放到胞质并以无活性的形式储存起来：用放线菌酮处理，不能阻止此酶的释放，但能使灭活降低；致使胞质的酶活性提高５－１５倍。热休克菌体核酸内外切酶的灭活是由于某种抑制物质的作用，后者来自酶前体的自身降解。作者推测由热休克诱导了一种蛋白酶，此酶使核酸内外切酶前体水解为抑制物质。     

核酸序列的模糊聚类与分子进化

将核酸序列(编码区)分成几类,求出每类的平均信息参数(D_L),用模糊聚类的方法研究它们的相似性和同源性,求出各级相似分岔值并导出动态聚类图.证明了短程相似分岔与序列进化有明显的相性,即L=2-5的一级相似分岔值与物种出现地质年代的对数保持较好的线性关系.