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11.
分泌性表达人rPA毕赤酵母工程菌株的构建及发酵条件的初步优化 总被引:2,自引:0,他引:2
通过PCR扩增得到组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(rPA)基因片断,将该基因片断插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPICgK/rPA,转化Pichia pastoris GS115宿主菌.通过比较转化子在MM和MD平板上的生长状况,筛选His^ Mut^s表型转化子.并在2.0mg/mL G418平板筛选得到多拷贝转化子GR10,GR11.摇瓶培养,甲醇诱导外源基因表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明重组蛋白分子量约39ku,能与特异性单克隆抗体发生免疫反应;体外气泡法测定rPA活性,结果显示重组蛋白具有较好的纤溶活性.通过正交试验,优化发酵条件,表达活性最高为1050IU/mL. 相似文献
12.
将化学法合成的apoAI基因插入分泌型载体pPIC9K.将重组的pPIC9K—apoAI用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子.转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rApoAI表达.经Phenyl—sepharose 6(Fast Flow)疏水层析柱和Sephadex G-50(coarse)分子筛层析,得到rApoAI蛋白纯品.经Western blotting,N末端氮基酸顺序测定证明,毕赤氏酵母表达的rApoAI与人血浆提取的ApoAI基本一致. 相似文献
13.
14.
15.
《河南师范大学学报(自然科学版)》2016,(6):145-148
粘绿木霉Gv29-8作为木霉属中重要的生防菌之一,对该菌分泌蛋白进行预测及其特征进行明确具有重要的理论意义。利用SignalP、ProtComp等预测程序对该菌中12427条蛋白质序列进行分泌蛋白找寻,并对上述分泌蛋白的氨基酸分布、信号肽长度大小及切割位点等性质进行分析。粘绿木霉含有分泌蛋白为377个,其氨基酸长度、信号肽长度与植物病原菌不同;信号肽切割位点属于A-X-A类型,与其他已经报道的植物病原真菌、卵菌中分泌蛋白信号肽切割位点一致。 相似文献
16.
蛋白酶A(EC 3.4.23.6)是酿酒酵母中重要的蛋白酶,与酶原激活、生孢等多种生理功能密切相关.在酒类酿造过程中往往会发生蛋白酶A外泌进而影响发酵产品质量的现象.研究胁迫条件下蛋白酶A的外泌及其调控机制,对于酿酒酵母菌种选育和酒类产品质量控制具有重要的理论指导意义.本文主要对蛋白酶A外泌机制和蛋白酶A外泌对酒类酿造影响的相关研究进行综述. 相似文献
17.
研究邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)对雄性生殖内分泌系统的损害作用及其机制.将不同剂量的BBP(0、0.45、0.9、1.8 mL/kg),每日对Wistar雄性大鼠连续灌胃,染毒30 d、60 d,测定大鼠血清中FSH、LH、T和睾丸匀浆中T的水平及睾丸标志酶ACP、γ-GT的活性.随着BBP染毒剂量的增加及时间的延长血清中及睾丸匀浆中T的水平显著下降(P<0.01),血清中LH、FSH呈上升趋势(P<0.05),睾丸中ACP水平先升后降,γ-GT的活性则明显下降(P<0.01).BBP对雄性失鼠有明显的生殖毒性,影响其血清及睾丸性激素水平和酶活性,这可能与BBP对支持细胞和生精上皮的损害有关. 相似文献
18.
目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白/β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H2s供体,实验设空白对照组、NaHs50μmol/L组、NaHS100μmol/L组和NariS200μmol/L组,按分组浓度处理PC12细胞24h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,EusA法检测细胞培养液中AB40和AB42水平。结果NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Ap40和Ap42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义(P〈0.05),而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性(P〉0.05)。结论外源性H2s具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP/Aβ代谢的作用。 相似文献
19.
目的:观察普林格式治疗仪促进产后乳汁分泌的疗效。方法各选取100例产后30 d乳汁量少的产妇,一组接受普林格尔治疗仪治疗,称为观察组,一组只接受传统方法治疗,称为对照组,观察两组产妇乳汁量的变化。结果经过普林格尔治疗仪治疗和指导的观察组效果明显优于只接受传统方法治疗的对照组,差异具有显著性(p〈0.05)。结论普林格尔治疗仪有利于促进产妇产后的乳汁分泌,且操作简单、风险小、无副作用,值得推广。 相似文献
20.