不同血糖水平的冠心病患者外周血中Th1、Th2细胞比例变化分析

目的 探讨不同血糖水平的冠心病患者外周血中1型辅助性T细胞(Th1)、2型辅助性T细胞(Th2)的细胞比例变化.方法 选取冠心病患者86例，根据血糖检测结果分为冠心病血糖正常组34例，冠心病合并糖耐量异常组20例，冠心病合并糖尿病组32例；另收集同期健康志愿者25名为健康对照组.采集空腹外周静脉血，检测空腹血糖、糖化血红蛋白、γ干扰素、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素10水平.分离外周血单个核细胞，流式细胞仪检测Th1、Th2细胞比例.分离并培养人脐静脉内皮细胞，并使用免疫磁珠清除外周血单个核细胞中CD4⁺T细胞，进行人脐静脉内皮细胞毒性试验.出院后对冠心病患者进行1 a的随访，记录主要不良心血管事件发生情况.结果 冠心病合并糖尿病组患者空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显高于健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组Th1细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组，Th2细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组(P<0.05).冠心病合并糖尿病组γ干扰...     

树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

摘要: 目的 建立树鼩角膜内皮细胞( corneal endothelial cells,CECs) 体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法 通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代 CECs 取材方法的优劣性。分别使用 DMEM /F12,M199,Ham’s F12 /M199 三种培养液以确定树鼩 CECs 原代细胞最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩 CECs 纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶( NES) 设计并筛选特异性引物,使用 PCＲ 方法检测细胞 NES 表达情况并用 NES 抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果 揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩 CECs 细胞。Ham’s F12 /M199 培养液是树鼩 CECs 的最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂可以达到 CECs 的纯化目的。结论 优化的树鼩 CECs 细胞培养纯化方法对树鼩 CECs 的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合 CECs 的一般特征。     

山刺玫果降血脂、抗氧化及保护血管内皮功能的实验研究

目的研究野生山刺玫果对高脂大鼠血脂代谢的影响、抗氧化及保护血管内皮功能的作用.方法观察不同剂量山刺玫果对高脂大鼠血清TC,TG,HDLC,SOD,GSH-Px,NO和内皮素(ET)的影响,以及对血清、肝脏、大脑组织MDA的影响.结果山刺玫果(4.0 g/kg)可显著降低高脂大鼠血清TC,TG,ET含量(P<0.01),并明显提高HDLC,NO含量(P<0.01);1.0 g/kg山刺玫果可明显降低血清及肝脏MDA含量(P<0.05),2.0 g/kg剂量可明显提高SOD,GSH-Px活性(P<0.05),以上给药时间56 d.结论山刺玫果具有显著降血脂、抗氧化、保护血管内皮细胞的作用,具有防治动脉硬化作用.     

TNF-α干预内皮细胞后MAPK与NF-kB之间关系的研究

目的：研究肿瘤坏死因子（TNF-α）干预下人脐带静脉内皮细胞（HUVEC）核因子-kB（NF-kB）活性的变化情况及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路之间的关系。方法：培养HUVEC用TNF-α干预,观察NF-kB活性和抑制物IkBα表达,并观察胞外信号调节激酶抑制剂PD098059、C-Jun氨基末端激酶抑制剂SP600125、P38MAPK抑制剂SB203850和PDTC对TNF-α激活内皮细胞NF-kB的影响,用凝胶迁移实验测定NF-kB活性,Western Blotting检测其抑制物IkBα的表达情况。结果：10ng/mL的TNF-α处理30min后NF—kB活性开始增强,4h后恢复正常,IkBα的表达在30min开始下降,4h恢复正常;PD098059和SP600125预处理组NF-kB的活性没有减弱,SB203850与PDTC预处理组NF-kB活性减弱并减弱程度相同。结论：在体外培养的HUVEC中,TNF-α通过降解IkBα而活化NF-kB,P38MAPK通路参与了这一过程。     

血液黏度调节与疾病的防治

血液黏度在保持血管稳态中发挥重要作用,在生理状态下,机体通过多种调节机制保持血液黏度相对稳定.在病理条件下,由血管内皮细胞功能障碍等引起的血液黏度调节机制异常与心脑血管疾病、糖尿病及失血性休克等疾病的发生、发展密切相关.对血液黏度的监测和调整在疾病诊断、治疗和预后判断中具有重要的意义.本文就血液黏度调节在疾病防治中的作用做一综述.     

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响张利华，李方勇，王耀发（华东师范大学河口海岸国家重点实验室上海２０００６２）流式细胞术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是７０年代末发展起来的一种快速高效的单细胞分析及分选的新技术。它在细胞生物学上的一个...     

苦参碱减轻糖氧剥夺复糖复氧对大鼠脑微血管内皮细胞损伤

为了研究苦参碱对脑缺血再灌注损伤的保护作用,实验通过离体培养鼠脑微血管内皮细胞,采用糖氧剥夺复糖复氧的模型,体外模拟脑缺血再灌注对脑血管内皮的损伤,研究苦参碱对内皮细胞的保护作用.苦参碱减轻糖氧剥夺复糖复氧对脑微血管内皮细胞的损伤,提高内皮细胞的生存率,同时增加损伤细胞线粒体ATP的生成.因此,苦参碱对糖氧剥夺复糖复氧损伤血管内皮细胞具有保护作用.     

表达Kallistatin的9型重组腺相关病毒的制备及其体外表达效率

采用三质粒磷酸钙共转染生产系统,制备出可以表达内源性抗肿瘤血管生成因子(Kallistatin)的9型重组腺相关病毒(rAAV2/9)和2型重组腺相关病毒(rAAV2/2).rAAV经银染法鉴定其纯度;采用WesternBlotting法比较rAAV2/9和rAAV2/2外壳蛋白的大小;qPCR方法检测rAAV的滴度.使用rAAV2/9-Kal-listatin和rAAV2/2-Kallistatin分别感染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)后,RT-PCR和ELISA法分别检测Kallistatin的mRNA和蛋白表达水平.结果表明:纯化的病毒纯度达到98%以上;rAAV9外壳蛋白比rAAV2的大.感染HUVEC后,rAAV2/9介导Kallistatin在mRNA和蛋白表达水平都要比rAAV2/2高.     

聚焦超声近场辐照内皮细胞前后的差异蛋白质组学研究

比较聚焦超声近场辐照内皮细胞前后蛋白质的差异,可为聚焦超声近场所致生物学效应提供依据.用聚焦超声近场辐照内皮细胞株HUECV304,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离聚焦超声近场辐照与未辐照HUECV304细胞的蛋白质,切取差异蛋白质条带,采用液相色谱电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-ITMS/MS)鉴定差异表达的蛋白质.LC-ESI-ITMS/MS识别相对分子量在(95～130)×103区域的2条差异条带中的7个差异表达蛋白质.Western印迹分析证实了肌动蛋白(Actin)在聚焦超声近场辐照与未辐照HUECV304细胞中的差异表达水平.7个差异表达蛋白质为进一步研究聚焦超声近场辐照内皮细胞所致生物学效应提供了线索.     

反义核酸技术对人血管内皮细胞的改造作用

为降低在血栓形成早期血管内皮细胞分泌的血管性血友病因子(vWF)对凝血级联反应的触发效应,利用反义核酸技术构建降低vWF表达量的血管内皮细胞.人工合成vWF部分反义核酸(pvWF),构建重组的真核表达载体pcDNA3.1( )/pvWF.测序正确后用脂质体介导的方法转染血管内皮细胞,硫酸新霉素加压筛选后扩大培养转基因细胞,RT-PCR法检测转基因细胞中vWF mRNA的表达水平.结果表明,构建的vWF反义核酸真核表达载体能有效抑制细胞中vWF mRNA的表达,为新型抗凝血材料的研究提供一种基因改造的内皮细胞.