地中海伞藻(Acetabularia mediterranea)叶绿体DNA串联重复顺序的克隆和限制性内切酶图谱分析

以COS质粒(cosmid)pCOS 2EMBL 为载体,构建了地中海伞藻叶绿体基因组分子克隆库,并且筛选到含有串联重复顺序的克隆。经限制性内切酶酶解图谱分析,证明了串联重复顺序的存在,重复次数为4次以上。     

Ri质粒转化及其在植物基因工程中的应用

发根农杆菌Ｒｉ（Ｒｏｏｔｉｎｄｕｃｉｎｇ）质粒为一种植物基因工程新载体。近年来，国内外对Ｒｉ质粒的遗传转化进行了大量的研究，本文结合自己的一些研究工作对Ｒｉ质粒转化及其应用作一综述。     

超螺旋PGEM-1重组质粒的提取、纯化与鉴定

本文采用Sepharose2B层析法去除粗提物中的RNA,用0.7％低融点琼脂糖凝胶回收超螺旋质粒,使质粒的纯化过程费时较少且获得令人满意纯度的超螺旋质粒。     

重组质粒pPRS—1超声转化蓝藻Chroococcus sp.的研究

介绍了超声转化蓝藻的方法，并用此方法获得了重组质粒ｐＰＲＳ－１转化Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．的转化藻落。从这些转化藻落中检测到重组质ｐＰＲＳ－１。此结果证明重组质粒ｐＰＲＳ－１是一种Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．之间均可转化的穿梭质粒。     

恶臭假单胞菌萘质粒I N L基因的克隆及酶切图谱

恶臭假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ Ｇ７）携带的ＮＡＨ７，经限制内切酶ＥｃｏＲ１切割后，产生含有萘降解酶全部基因（２４．６ｋｂ）的片段，此片段插入到载体ＰＵＣ１１９的多克隆位点，构成了ＰＫＡＯ质粒，此质粒经Ｈｐａ １，ＥｃｏＲＩ酶切获得的５．１ｋｂ片段亚克隆到ｐＵＣ１１９中，衍生出ｐＮＮ１质粒，绘制出内切酶图谱，绘制出内切酶图谱，从ＰＮＮ１质粒上切下含目的基因ｎａｈＩ、ｎａｈＮ和ｎ     

氧化亚铁硫杆菌质粒pTf—52限制图谱和嵌合质粒pSDF—1的构建

从一株氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)中分离到一个分子量为4.5×10~6Md 的质粒 pTf—52,用 Pst Ⅰ、BglⅡ、Kpn Ⅰ酶切此质粒,进行限制性酶切分析,作出了 pTf—52的限制图谱;并将 pTf—52插入到 pBR325的 Pst Ⅰ位点,体外重组,转化 E.coli HB101,构建成一个能够在 E.coli 中进行复制的嵌合质柱 pSDF—1(Tc~rCm~rAp~s),分子量为8.2×10~6Md。经限制性酶切分析,确证 pSDF—1是由 pBR325和 pTf—52重组成的,并确定了这两种质粒在 pSDF—1中的连接方向。     

基因重组质粒稳定性与苯丙氨酸发酵的研究

本研究应用具有苯丙氨酸生产基因 pheA~(FR)、aroF~(FR)、CI_(857) 的质粒 pSY130～14和质粒 pS Y16,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的新质粒 pSY200-14。然后,使其转化到大肠菌 AT2471中,育成了基因重组菌株 AT2471/pSY200-14。试验表明,新菌株质粒稳定性比原菌株有较大的提高。在2. 5升通气搅拌罐进行苯丙氨酸发酵试验,在搅拌转速850rpm、通气速率1. 0VVM,38. 5℃和 pH7. 0的条件下,发酵48小时苯丙氨酸生成量达14. 2g/L,比原菌株 AT2471/pSY130-14增产11. 8%。     

氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125的构建及其在大肠杆菌之间的转移

对氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)隐蔽性质粒pTt12进行了限制性酶切分析,并绘出了限制性酶切图谱,其大小为13.7Kb.将pTt12质粒与pBR325质粒重组,得到了重组质粒pSDT125(Cm',Ap',Tc~s).氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125本身不具有接合转移能力,但它在广泛寄主范围的转移性质粒RP4的带动下以较高的频率在大肠杆菌(Escherichia coli)之间转移,表明在氧化硫硫杆菌质粒pTt12上存在着与接合转移有关的DNA序列.     

利用EBV穿梭质粒表达人凝血Ⅸ因子的初步研究

目前开展的遗传病基因治疗研究大多是先取患者体细胞体外培养,通过反转录病毒感染使正常基因cDNA整合于基因组中,选择克隆、扩增,再将细胞植回病人体内.但有以下问题:(1)细胞表达水平的高低很大程度取决于基因的整合位置,各克隆的表达相差悬殊,虽可通过挑克隆解决这一问题,但挑克隆工作量大,且克隆细胞如传代次数过多亦不利于其表达.(2)病毒载体通常只带一份拷贝进入细胞,转基因产物的表达量不高,这样植回病人体内的细胞就需     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒的研究

从广西各地的八个温泉的水样中分离到２０株耐药的嗜热脂肪芽孢杆菌，用改良的ＢｉｎｇｈａｍＳＤＳ裂解法，从其中的１５株菌中检测到质粒。再用琼脂糖凝胶电泳法及电子显微镜技术对耐氨苄青霉素（２５μｇ·ｍｌ－１）的１２号菌株的质地作了较深入的研究。发现该质粒为共价闭合坏状ＤＮＡ分子（ＣＣＣＤＮＡ），共分子量为１４．６３×１０６，澳化乙锭（１μｇ·ｍｌ－１）和吖啶橙（２０μｇ·ｍｌ－１）共同作用可将该质粒消除掉。该质粒的功能有待进一步研究。