人HCUTA全长cDNA的克隆与原核表达

人ＨＣＵＴＡ是最近克隆的一个新的全长cＤＮＡ,编码蛋白可能参与人铜离子容受系统。 ＪＣＩＴＡ的全区用〗ＣＲ拉示后。克隆到ｐＥＴ２８ａ＋表达载体中,在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达,表达的ＨＣＵＴＡ重组蛋白细菌总蛋白的２８．３％。ＨＣＵＴＡｃＤＮＡ的ＧｅｎＢａｎｋ接收号为ＡＦ１０６９４３。     

水稻全长均一化cDNA文库构建及SDG725结合蛋白筛选

为了筛选水稻组蛋白甲基转移酶SDG725的结合蛋白,构建了水稻全长均一化cDNA文库,以SDG725C末端为诱饵蛋白对cDNA文库进行筛选.最后筛选到70个可能与SDG725相互作用的蛋白,同时对筛选出的候选蛋白进行GO功能分析和亚细胞定位预测,并对部分蛋白与蛋白相互作用进行了验证.研究结果发现筛选到的结合蛋白有17%位于细胞核中,更多位于核外,为进一步研究SDG725的生物学功能提供理论基础.     

中华绒鳌蟹卵巢发育相关的新基因EJO3的克隆和特征分析

运用了抑制性差减杂交和cDNA芯片技术鉴定中华绒鳌蟹卵巢发育相关基因,并用5'和3'RACE的方法克隆了一个与Ⅱ期相比在卵巢发育的Ⅲ期高表达的新基因EJO3(GenBank登录号:AY185919).EJO3基因的开放阅读框(ORF)长1 368 bp,编码455个氨基酸.从氨基酸序列推算的EJO3的等电点和相对分子质量分别为5.79和50 000.生物信息学分析表明,EJO3可能是一个含有VWD结构域的分泌蛋白.EJO3在Ⅱ期和Ⅲ期卵巢的差异表达用Northern blot进行了进一步验证.组织表达谱分析表明EJO3在卵巢高表达,在肠、心脏、肌肉和肝胰腺中弱表达或不表达.本研究结果为进一步深入研究中华绒鳌蟹卵巢发育的分子机制奠定了重要的前期工作基础.     

青岛文昌鱼神经胚中期cDNA文库的构建

提取青岛文昌鱼18小时神经胚中期mRNA,以5＇脱磷的NotI-oligo(dT)18为引物,反转录合成cDNA.双链cDNA的5＇端钝端连接上带EcoRI突出末端的衔接头,再经NotI酶切,在cDNA的3＇端形成NotI突出末端.以SizeSep离心层析柱除去400bp以下的小分子,与带有NotI和EcoRI突出末端并经过5＇端脱磷的λExCellNotI/EcoRI/CIP载体DNA进行连接,经体外包装和感染NM522宿主菌,得到了3.6×10     

黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶基因（MnP2）的克隆

应用RT-PCR技术,从黄孢原毛平革菌5.766（Phanerochaete chrysosporium）总RNA中成功扩增出预期大小约为1.3 kb的特异性条带,将扩增产物提纯后克隆入PUC19载体,经转化、筛选及酶切鉴定后,获得锰过氧化物酶（MnP2）基因的克隆。序列分析表明,扩增的MnP2基因片段其cDNA长度为1 149 bp,编码358个氨基酸,与其它已发表文献报道的MnP2序列一致,与其同工酶MnP1和MnP3的核苷酸同一性分别为81%和66%。     

应用cDNA微阵列芯片筛选胃癌转移相关基因的初步研究

采用cDNA微阵列技术建立胃癌原发灶和淋巴结转移灶基因表达谱,识别和克隆胃癌转移相关基因。用含10000个已知基因和7000个EST的cDNA微阵列分析胃癌原发灶和淋巴结转移灶表达谱的变化,利用生物信息学分析差异表达基因, RT-PCR和反向Northern点杂交验证cDNA微阵列结果。发现2倍以上的差异表达基因601个,其中淋巴结转移灶中表达上调527个,表达下调74个;2倍以上的差异EST 71个,其中淋巴转移灶中表达上调62个,表达下调9个。在胃癌原发灶中,与细胞免疫、发育、信号转导功能相关基因存在高表达;而在淋巴结转移灶中,与细胞生长、细胞周期、细胞运动和粘附功能相关基因存在高表达。RT-PCR和反向Northern点杂交结果进一步证实carbonic anhydraseⅡ、IGFBP-4基因高表达与胃癌转移相关。通过分析胃癌原发灶和淋巴结转移灶表达谱的变化,发现一些与胃癌转移相关的基因和EST,为进一步寻找和克隆胃癌转移相关基因提供研究线索。     

半夏凝集素基因的克隆

利用RACE－PCR技术从半夏花序中克隆出半夏凝集素的全长cDNA,通过比较半夏同其他天南星科植物的凝集素基因序列和推测的氨基酸序列,发现半夏凝集素基因编码一具有信号肽的前体蛋白,半夏凝集素同其他天南星科植物凝集素一样,为具有3个甘露糖专一结合盒的凝集素。