牛磺酸对高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制

探讨牛磺酸对高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及其作用机制,以H9c2心肌细胞,分3组:正常对照组(CN组,葡萄糖浓度为5.5 mmol·L~(-1))、高糖组(HG组,葡萄糖浓度为25.5 mmol·L)、牛磺酸干预组(TAU组,葡萄糖浓度为25.5mmol·L~(-1)基础上加终浓度为40 mmol·L~(-1)牛磺酸)。48 h后,采用MTT检测心肌细胞活力,荧光酶标仪检测胞内ROS含量,RT-PCR法检测PI3KmRNA表达量,ELISA法检测磷酸化Akt蛋白(phospho-Akt,p-Akt)蛋白含量,比色法检测Caspase3水平,并采用Annexin-V/PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:高糖诱导48 h后细胞活力下降(P0.001),ROS含量升高(P0.001),PI3KmRNA水平与p-Akt蛋白含量降低(P0.001),Caspase3活性升高(P0.001);并伴有凋亡率显著增加(P0.001);与HG组相比,牛磺酸干预可显著提高细胞活力(P0.001),降低ROS含量(P0.001),增加PI3KmRNA表达(P0.01)与p-Akt蛋白含量(P0.05),降低Caspase3活性(P0.001),抑制细胞凋亡(P0.001)。说明牛磺酸可通过PI3K/Akt途径降低细胞内氧化应激水平和Caspase3活性,抑制高糖诱导H9c2心肌细胞的凋亡。     

液体发酵高产纳豆激酶菌株的复合诱变选育

从市售豆豉和保藏的固体发酵产纳豆激酶(NK)高活性的菌株中,筛选出5株诱变育种出发菌株.经紫外-亚硝基胍-Co60复合诱变后,获得5株液体发酵产NK高活性的菌株LJJ-1-13-12-4、PXDBJ-13-9-7-18、DNS-17-3-15-7、CBL-2-7-10-6和L-5-8-15,其产NK活性,分别为1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23 U/mL,分别是诱变前出发菌株的1.62、1.81、1.98、1.61和1.62倍.高产纳豆激酶菌株的选育为纳豆激酶液体发酵的进一步工业化奠定了良好的基础.     

ZAP-70在ITAM活化中的作用

在假设ITAM两步磷酸化的基础上,建立理论模型,定性讨论了ZAP-70在ITAM活化中的作用.结果表明:TCR与MHC-pep抗原多肽的亲和力是影响免疫应答的一个重要参数,但ZAP-70对ITAM活化事件的正反馈调节会使得TCR对特异性抗原识别的敏锐性降低,当这种调节达到一定程度时,免疫应答将不再依赖抗原的特异性.进一步讨论了半活化状态的ZAP-70的作用,运用此模型还解释了ITAM的活化过程存在一个ITAM/ZAP-70的浓度阈值问题.     

Regulation of mouse blastocyst adhesion,outgrowth and matrix metalloproteinase—2 by focal adhesion kinase

The interaction of extracellular matrix-integrin markedly influences the adhesion,outgrowth,differentiation and expression of serine proteinases by the blastocyst,so it is regarded as a vital factor in blastocyst implantation.Although the mechanism of extracellular interactions between extracellular matrix and integrins has been well elucidated,the roles of the signaling molecules in the extracellular matrix-integrin signal transduction pathway in blastocyst implantation are unknown.This limits the understanding of blastocyst implantation and ECM-integrin signal transduction pathway.In the present study,in vitro blastocyst culture and indirect immunocytochemistry,matrix metalloproteinases(MMPs) zymography and antisense oligodeoxynucleotide(ODN) were used to investigate the expression of a fundamental molecule of integrin-dependent signal transduction pathways,focal adhesion kinase(FAK),in mouse blastocysts and its influence on mouse blastocyst adhesion,outgrowth and MMP-2.The results showed that mouse blastocysts expressed FAK.FAK protein was clustered in the peripheral migrating trophoblast cells and dispersed in the central area of blastocyst outgrowth.Fibronectin triggered pro-MMP-2 and 64kD MMP-2 activities.The antisense ODN to FAK attnuated pro-MMP-2 and 64kD MMP-2 activites which decreased abruptly and tended to disappear with increasting concentrations of the antisense ODN.Both mouse blastocyst adhesion and outgrowth on fibronectin were also influenced by the antisense ODN.Up to 20μg/mL of the antisense ODN concentration,the adhesion and out-growth rates were decreased in a dose-dependent manner.The results indicated that FAK influenced mouse blastocyst adhesion,outgrowth and MMP-2 activity by intracellular signal transduction.In other words,FAK regulates mouse implantation in terms of blastocyst adhesive and invasive abilities.     

酪氨酸激酶抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤正一直严重威胁着人类生命，尽管诊断和治疗水平有所进步，但很多肿瘤生存率一直很低。近年来随着科学的发展，我们对肿瘤的生物学特性有了更深一步的认识。人类蛋白酪氨酸激酶（PTKs）在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用，它已成为一种很有前景的肿瘤治疗新靶点。PTKs抑制剂研究已成为当今世界抗肿瘤研究的热点领域，这些药物在临床前期研究中已显示很好的抗肿瘤效应，一些正在临床上作为很有前景的抗癌药。特别是BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂imatinib（STI571）在治疗慢性髓细胞白血病显著成功使得科学家们更热心于投入这一领域的研究，目前，至少有30多种酪氨酸激酶抑制剂在肿瘤治疗的不同临床试验阶段，大约120多个临床试验正在世界范围内进行。在此对酪氨酸激酶在肿瘤中的作用及酪氨酸激酶抑制剂在肿瘤治疗中的研究进展作一综述。     

蛋白激酶TTK与CENP-E相互作用并共定位于人细胞的动粒

纺锤体检验点（spindle checkpoint)是一个重要的细胞分裂化调节通路，监督染色体正确分离和传代，其信号传导主要通过两个蛋白激酶Mps1和Bub1/BubR1来调控，近期的研究发现动粒马达蛋白CENP-E与BubR1相互作用并参与纺锤体调控点的作用，为阐明纺锤体检验点分子调控机理，利用动粒蛋白质组学技术剖析人细胞动粒的蛋白质组成时发现了TTK蛋白-人细胞Mps1。揭示了TTK蛋白激酶定位于动粒，并与CENP-E相互作用，可能参与监控人细胞分裂过程中的染色体分离。     

纳豆激酶原基因的克隆及表达

从纳豆菌中克隆具有溶血栓性质的纳豆激酶原的基因，与质粒PBV220连接，转化大肠杆菌E.coli DH5α。挑取阳性克隆用EcoR I/BamH I双酶切鉴定得到一条约1000bp的条带。阳性克隆经温度诱导表达，用SDS－PAGE电泳鉴定，在38kD处有一条明显的带，占菌体蛋白的20％左右，同时还表明该蛋白以包涵体的形式蛋白分子量为存在。包涵体经收集、蛋白变性及复性后显示溶血栓活性。     

Reverse micelles extraction of nattokinase： From model system to real system

Nattokinase (also named subtilisin NAT) was pri- marily isolated from a traditional fermented food in Japan, ‘‘Natto’’, by Sumi et al.[1]. Since then more and more reports of pharmacological researches on natto- kinase demonstrated that nattokinase showed many advantages, such as longer half life, greater fibrinolytic activity than plasmin, availability for both oral admini- stration and intravenous instillation, both preventive and therapeutic measure against thrombosis, less risk of he…     

双萜化合物对FOXO3a核转位调控机制

从中国传统药用植物绣线菊中提取一种可以引起bax和bak非依赖性细胞凋亡的双萜类化合物,并将其命名为S3.前期的研究发现S3可引起bax-/-/bak-/-MEF细胞活性氧(ROS)水平显著升高,并激活FOXO3a,促进其从胞浆转位至细胞核.然而由S3介导产生的活性氧是如何激活FOXO3a转录因子的,目前仍不是很清楚.本研究发现S3诱导细胞凋亡过程中可以激活JNK、ERK信号通路,同时显著地抑制AKT的活性;而ROS的清除剂NAC有效地抑制JNK、ERK的激活,促进AKT的活化,同时抑制FOXO3a的核转位.从而证实由S3介导产生的活性氧通过调控JNK、ERK、AKT激酶的活性,进而调控FOXO3a的核转位活性.     

家蝇精氨酸激酶基因克隆及其在害虫防治上的应用

从家蝇转录组数据库中筛选到一条精氨酸激酶同源序列,将其命名为家蝇精氨酸激酶(Musca domestica arginine kinase,简称:MdAK).通过RT-PCR克隆得到MdAK cDNA序列,长2 007bp,编码356个氨基酸残基,编码蛋白的分子质量为40.0ku.利用RNAi技术敲低家蝇幼虫精氨酸激酶的表达后,其生长发育受到影响,死亡率明显升高.认为精氨酸激酶可以作为害虫生物防治的潜在靶点.