ELISA 抗原检测与荧光 RT-PCR快速诊断猪瘟的比较研究

为找出临床上猪瘟快速、有效的诊断方法,对荣昌县2个猪场出现的40头临床症状疑似猪瘟的病猪进行病理剖检,结果证实有8头病猪出现猪瘟典型症状.采集40头病猪的血样,进行ELISA猪瘟抗原检测和荧光RTPCR猪瘟核酸检测,结果显示ELISA抗原检测检出7份血样为猪瘟抗原阳性,阳性检出率为87.5%;荧光RTPCR核酸检测出4份血样为阳性,阳性检出率为50%.该结果证实,ELISA猪瘟抗原检测的阳性检出率比荧光RT-PCR核酸检测更高,建议临床上采用ELISA抗原检测的方法进行猪瘟的快速诊断.     

δ-氨基-γ-酮戊酸合成酶(ALAS)基因的克隆与原核表达

为获得ALAS的重组表达蛋白,以人肝脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增得到ALAS全长片段并测序,成功构建了pET30a(+)-ALAS融合表达载体并转化大肠杆菌Rosetta(DE).IPTG诱导融合蛋白表达.SDS变性凝胶电泳结果显示,融合蛋白的分子量约70kDa,并且在上清液中有少量表达.经镍柱一步纯化得到His6-ALAS融合蛋白.     

中国西南主要苹果产区潜隐性病毒分子鉴定

为了深入了解苹果受潜隐性病毒的影响情况,本研究针对云南、贵州、四川三省的387份苹果叶片样本,利用RT-PCR及多重RT-PCR技术,分析鉴定了三种苹果潜隐性病毒——苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)在苹果上的发生现状.结果显示,苹果样本中ASPV阳性率为89.4%,ASGV阳性率为100%,ACLSV阳性率为81.6%,且它们多为混合感染,共计304份样本同时感染了三种病毒,混合感染率为78.5%.与云南、贵州相比,采自四川的苹果样本受潜隐性病毒感染最为严重.本研究报道了我国西南苹果主产区潜隐性病毒感染现状,建立了一套快速有效的苹果潜隐性病毒分子生物学鉴定方法.     

用RT-PCR方法检测达乌尔黄鼠(Spermophilus dauricus)白色脂肪组织中瘦素的基因表达

达乌尔黄鼠（Spermophilus dauricus）作为研究冬眠的优良模式动物,已经在医学、生理学以及生态学领域得到广泛的应用。但是目前尚未见使用分子生物学手段对达乌尔黄鼠（Spermophilus dauricus）进行冬眠机理方面的研究。瘦素在调节摄食、能量平衡和入眠方面都有非常重要的作用。尝试使用RT-PCR这一分子生物学技术对达乌尔黄鼠的瘦素和β-actin进行特异性扩增,并对其进行克隆测序,得到了达乌尔黄鼠的瘦素和β-actin基因片段的序列,为研究达乌尔黄鼠冬眠的分子机制提供基础数据。同时总结了用RT-PCR方法检测未知基因序列物种有关基因表达时需要注意的一些问题。     

人类新基因CHID1的克隆与功能初步研究

使用生物信息学手段,从人公共蛋白质数据库的蛋白质序列中筛选到新的分泌蛋白基因CHID1(Chitinase domain containing 1),该基因定位于人11号染色体短臂15区5带(11p15.5),cDNA长1 182 bp,其编码蛋白共有393个氨基酸。转染COS-7细胞后Western blot实验显示:在细胞培养液中没有检测到CHID1蛋白。对CHID1基因在mRNA水平上进行组织分布考察发现:它在肺、肾、肝、心、胸腺中都有表达,肝中最高。细胞生长曲线揭示,Lovo-CHID1稳定细胞株有生长抑制的现象,而细胞周期分析发现细胞株在G1期发生阻滞。这表明CHID1有可能是个潜在的抑癌基因。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒RT-PCR检测方法的建立

设计了一对特异性引物,对16头临床症状、病理变化和ELISA检测呈阳性的猪繁殖与呼吸障碍综合征疑似病例的肺脏、脾脏和淋巴结以及种公猪的精液进行了RT-PCR扩增。结果显示16头样品的相应组织及精液都扩增出特异性基因片段,阳性符合率为100%,8头猪繁殖与呼吸障碍综合征血清ELISA检测为阴性的对照样品中有2头扩增出阳性片段,检出率为25%。RT-PCR检测方法的建立为猪繁殖与呼吸障碍综合征的准确诊断提供了技术手段。     

油菜一个WRKY基因对盐胁迫和干旱胁迫的表达响应

以抗性不同的3个油菜品系为材料,半定量RT_RCR方法检测油菜叶片WRKY转录因子家族的BnD11基因在高盐和干旱胁迫下的表达情况.高盐和干旱胁迫6 h后BnD11基因表达量即有明显调高,在抗性最强的‘862'品系中表达量增加幅度最高,而在抗性最弱的‘1821'品系中表达量增加幅度最少.结果表明BnD11基因表达量与油菜品系抗性强度具有明显正相关性,可能在油菜抗(耐)盐和干旱的生理过程中具有重要作用.