黑曲霉 A3 木聚糖酶的纯化和性质

黑曲霉Ａ３（ＡｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒＡ３）为高产木聚糖酶菌株。该菌所产生的木聚糖粗酶经硫酸铵、乙醇沉淀,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０分离纯化后,获得３个组分,分别称为Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３。它们的最适反应温度和ｐＨ依次为４０、５０、５０℃和３５、４５、５０。     

高压静电场诱变黑曲霉的实验研究

探讨了直流高压静电场对黑曲霉存活率、酶活、诱变率、菌落形态和菌体生长速度的影响.结果表明:高压直流静电场对黑曲霉A3的作用效果极其显著.在同一场强作用下,随着处理时间的增长,相对存活率单调下降;在同一处理时间作用下,随着场强的增大,相对存活率呈非单调性变化.在场强为4.4 kV/cm,处理时间为2 min的条件下,相对存活率最高达到237.5%,正变率最高达到15%,酶活比对照提高15%;在场强为5.6 kV/cm,处理时间为2 min的条件下,相对存活率达到125%,正变率达到8%,酶活最高,比对照提高24%.经高压静电场处理的菌落形态大而饱满,菌体生长速度明显加快.     

黑曲霉T21 glaA 5′上游调控区的两个蛋白结合因子及其靶序

采用凝胶阻滞法从糖化酶高产株黑曲霉(Aspergillusniger) T21部分纯化的蛋白提取液中检测到与糖化酶基因(glaA) 5′cis调控区特异结合的两个蛋白因子,其一的靶DNA定位在glaA翻译起始点(ATG)上游-580～-509及-318～-254bp两个区域,另一蛋白因子的靶DNA定位在-809～-580区域.-580～-509序列含有"TATA"的重复结构,-318～-254序列富含"GC"以及-809～-580序列含有CCAAT的特点暗示此3片段及其所结合的蛋白因子在A.nigerT21 glaA的表达调控中可能有重要作用.     

黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框与反式作用因子AngCP结合的分析

依次通过20%～40%饱和硫酸铵、凝胶过滤、肝素柱层析及DNA亲和层析纯化了黑曲霉糖化酶启动子区CCAAT框DC(-489 bp～-414 bp)结合蛋白(AngCP1)及CCAAT框PC(-390 bp～-345 bp)结合蛋白(AngCP2).凝胶过滤分析和SDS-PAGE结果表明AngCP1和AngCP2的分子质量均约为120 ku,由分子质量为34 ku和50 ku的亚基组成.Western blot显示两者的34 ku亚基均能特异性地与鼠抗AngHapC抗体产生反应,进一步的电泳迁移率实验证实AngCP1和AngCP2为同一蛋白质,称为AngCP.Southwestern blot显示34 ku亚基结合于DC,而50 ku亚基结合于PC,并且34ku亚基与DC的结合能力强于50 ku亚基与PC的结合.上述AngCP具有与DC,PC不等结合强度的特点暗示三者在糖化酶表达调控中有着重要作用.     

猫儿屎内生真菌DS58次生代谢产物的研究

首次对秦岭植物猫儿屎茎部分离到的内生真菌DS58的次生代谢产物的化学成分进行研究,经ITS序列分析,鉴定该菌株为曲霉属真菌。采用大米培养基对该菌株进行固体发酵,利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、重结晶等方法分离纯化得到了8个化合物,经波谱解析,分别鉴定为:(1)β-谷甾醇;(2)5α,8α-环二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇;(3)5-羟基-2(3H)-苯并呋喃酮;(4)2,5-二羟基苯乙酸乙酯;(5)2,5-二羟基苯乙酸甲酯;(6)琥珀酸;(7)2,5-二羟基苯乙酸和(8)cannabifolactone A。化合物(3),(4),(8)均首次从真菌的发酵物中分离得到。     

UV和NTG复合诱变柠檬酸生产菌种黑曲霉

为了提高柠檬酸的生产水平,利用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)对柠檬酸生产菌种黑曲霉进行了复合诱变,通过溴甲酚绿选择性平板初筛和摇瓶复筛,获得了一株遗传性能稳定的高产菌株UN-08,产酸率为15.80%.与出发菌株相比,产酸增幅达到26.40%,糖酸转化率为98.75%,发酵指数为1.32 kg/(m3·h).此外,通过对高产菌株UN-08的发酵条件进行研究,确定了此菌株生产接种的适宜孢子数量为106～108个/mL,发酵温度应控制在34～36℃内,溶氧应采用分段控制,前期(0～40 h)应控制在0.12 m3/(m3.min)左右、后期(40～96 h)应控制在0.15 m3/(m3·min)左右.     

丝裂霉素诱变黑曲霉产植酸酶过程模型化

用均匀设计分析方案,进行丝裂霉素C对黑曲霉化学诱变菌丝体和原生质体诱导产植酸酶选育,并以诱变时间(X_1)和丝裂霉素C的浓度(X_2)建立回归方程．实验筛选出具有4株较高酶活的菌株,诱变菌丝体得到2株酶活是始发菌株183．89％和147．55％;诱变原生质体得到2株酶活是始发菌株395．52％和381． 98％．由响应面模型初步判断,在丝裂霉素C浓度为5～30 mg·L-1和诱变时间45～60 min时,丝裂霉素C 对黑曲霉诱变原生质体选育产植酸酶菌株的效果比对菌丝体诱变效果好．用均匀设计对丝裂霉素C诱变菌丝体和原生质体的效果进行回归分析,所得模型调整后的相关系数分别为89．02％和99．13％,模型拟合程度好,实验误差小,可以用此模型较好的对丝裂霉素C的黑曲霉菌丝体诱变进行分析和预测．     

黑曲霉产纤维素酶系各组分特性及酶解条件

采用正交实验法分析出黑曲霉 3.316纤维素酶系各组分最适酶解条件 ,其组合分别为 C1酶 (p H5.0 ,4 5℃ ) ,Cx 酶 (p H3.5,6 5℃ )和 βG酶 (p H4 .5,6 5℃ ) .在液体发酵条件下 ,添加质量分数为 0 .0 0 3的碳酸钙时 ,各组分酶活性最高 ,其中以 C1酶明显增高 ,Cx 酶几乎无影响 ,βG酶则明显降低 .C1和 Cx 比酶活只有在碳酸钙质量分数小于 0 .0 0 5时才有提高 ,βG酶则明显降低 .添加蛋白胨 ,C1和 βG酶的最高酶活在碳酸钙质量分数小于 0 .0 0 3时有增加 ,Cx 酶则无明显变化 .碳酸钙和蛋白胨对各组分最高酶活形成时间均无影响 .在各组分酶分泌规律方面 ,仅有碳酸钙对 C1和βG酶有一定影响     

玉米生产柠檬酸生产工艺改进

近年来,随着农业的发展和生化发酵工艺研究的深入,以玉米作为新兴原料生产柠檬酸的工艺受到柠檬酸生产企业的青睐。与以薯干为原料的传统的柠檬酸生产工艺相比,以玉米为原料除了能产出高质量的柠檬酸,还具有减少有害物的排放和大大降低柠檬酸的生产成本等诸多优点。所以,研究和改进以玉米为原料的柠檬酸生产工艺是有重要意义的。